Kits TA Cloning®
La tecnología TA Cloning® simplifica enormemente la restricción y ligación tradicionales con una estrategia de clonación de un solo paso que elimina la necesidad de cualquier modificación enzimática del producto de la PCR y que no requiere el uso de primers que contengan sitios de enzimas de restricción.
Los kits TA Cloning® dependen de la complementariedad de bases de la adenina (A) y la timina (T) en diferentes fragmentos de ADN para su hibridación conjunta. Los productos de PCR se amplifican mediante una ADN polimerasa Taq que añade una sola desoxiadenosina al extremo 3' del producto. Los vectores linealizados suministrado en los kits TA Cloning® presentan residuos de desoxitimidina 3´ (T) complementaria, lo que permite la ligación del inserto en el vector con eficacia.
Velocidad con flexibilidad
| Con la adición de la ligasa de ADN T4 ExpressLink™ en los kits TA Cloning®, la ligación ahora se puede realizar a temperatura ambiente en solo 15 minutos con reacciones que normalmente producen > 80 % de recombinantes que contienen insertos. Los kits TA Cloning® están disponibles con una opción de vectores de pCR® 2.1 y pCR® II. Los promotores T7 y SP6 del vector pCR™ II permiten la transcripción in vitro del inserto para producir productos con sentido o antisentido. |
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Rendimiento y valor
Los kits TA Cloning® se encuentran disponibles sin células competentes (K2020-20 y K2020-40) o con E. coli químicamente competentes One Shot® INVαF’ (K2000-01 y K2000-40), y E. coli químicamente competentes One Shot® TOP10F’ (K2040-01 y K2040-40) en tamaños de paquete de 20 y 40 reacciones.
En el caso de TA Cloning® con el vector pCR® II (promotor doble) los kits se encuentran disponibles sin células competentes (K2750-20 y K2750-40), con E. coli químicamente competentes One Shot® INVαF’ (K2050-01 y K2050-40), y E. coli químicamente competentes One Shot® TOP10F’ (K2060-01 y K2060-40) en tamaños de paquete de 20 y 40 reacciones.
Los kits TA Cloning® superan al «competidor P» en rendimiento y valor.
| Kits TA Cloning® | Competidor P | |
|---|---|---|
| Eficacia de la clonación | 80 % (con control) | 60 % (con control) |
| Tiempo para la ligación | 15 minutos | 1 hora |
| Temperatura para la ligación | Temperatura ambiente | Temperatura ambiente |
| ¿Limpieza de PCR necesaria? | No | Recomendado |
| Antibióticos de selección | Kanamicina y ampicilina& | Ampicilina solamente |
Contenido del kit |
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| Vector |  |
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| Tampón de ligación | |
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| ADN de inserción de control | |
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| dNTPs | |
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| Agua esterilizada | |
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| Plantilla de ADN de control | |
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| Tampón de PCR | |
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| Primers de PCR de control | |
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¿Usa una enzima de corrección?
Las polimerasas termoestables que contienen una gran actividad de la exonucleasa de 3´ a 5´, como Platinum® Pfx, no dejan salientes A de 3´. Los productos de PCR generados con la polimerasa Taq tienen una alta eficacia de clonación en el sistema TA Cloning® porque los salientes A de 3´ no se eliminan. Sin embargo, si utiliza una polimerasa de corrección o desea clonar fragmentos de extremos romos, puede agregar salientes A de 3´ mediante incubación con Taq al final del programa de ciclos.
Alternativamente, quizá desee probar el kit de clonación de PCR Zero Blunt®. Este kit ofrece una clonación eficaz de productos de PCR con extremos romo generados utilizando polimerasas termoestables y de corrección.
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Asistencia y productos relacionados
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.