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Análisis cuantitativo del potencial de diferenciación en tres linajes

El panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® evalúa la pluripotencia y el potencial de diferenciación en tres linajes mediante ensayos de qPCR (reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa) en tiempo real y un software de análisis de datos intuitivo.

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Cuantificación del potencial de diferenciación en tres linajes de sus PSC (células madre pluripotentes)

¿Por qué elegimos el ensayo Scorecard™ de hPSC TaqMan®?
Jennifer Moore, RUCDR/Infinite Biologics

El ensayo Scorecard™ de hPSC fue desarrollado en colaboración con Alex Meissner y surge de su histórica publicación (Cell 144:439-452 (2011)). El software de análisis complementario aporta a los investigadores de cualquier parte del mundo la capacidad de comparar los perfiles de expresión génica de sus líneas de células con un conjunto común de referencia.

Requisitos de instrumentos

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Vea qué instrumentos son compatibles con panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® y cómo configurarlos.

Análisis de datos

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El panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® incluye acceso gratuito a un software intuitivo y gratuito basada en web que permite a los investigadores comparar cuantitativamente el perfil de expresión génica de su muestra con el de un conjunto de referencia.

Servicios CellModelTM

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¿Qué es?

Los paneles Scorecard™ de hPSC TaqMan® confirman cuantitativamente la pluripotencia (el potencial de diferenciación en tres linajes)
tanto para líneas de células madre pluripotentes inducidas como embrionarias. El panel Scorecard™ de hPSC (disponible en formato de 96 y 384 pocillos) contiene 94 ensayos de expresión génica TaqMan® predefinidos (incluidos controles endógenos) secados en los pocillos de la placa de ensayo. El panel de genes fue desarrollado en colaboración con Alex Meissner y sobre la base de su histórica publicación (Cell 144:439-452 (2011)).


El panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® ofrece lo siguiente:

  • Un ensayo cuantitativo para la confirmación de la pluripotencia y el potencial de diferenciación en tres linajes
  • Una comparación de los perfiles de expresión con un estándar de referencia
  • Una plataforma fácil de usar con ensayos previamente en placas y un software de análisis exclusivo e intuitivo


Descripción del protocolo:

  1. Probar las muestras no diferenciadas, de diferenciación espontánea (cuerpos embrioides, EB) o de diferenciación dirigida (monocapa)
  2. Extraer y purificar el ARN
  3. Generar el ADNc
  4. Ejecutar la expresión génica en un panel o un instrumento compatible con reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) 
  5. Cargar los archivos .eds en el software de análisis Scorecard™ de hPSC
  6. Analizar los datos y exportar los resultados de la cómoda aplicación de análisis basada en la nube

Cómo ejecutar el ensayo Scorecard™ de hPSC

ESC/iPSC sin diferenciar

ESC/iPSC diferenciadas: Cuerpos embrioides (semana 1) o células directamente diferenciadas.

Requisitos de la muestra: >1 x 106 células/muestra

Aislamiento de ARN

 

 Fórmulas

Extracción de fase orgánica TRIzol®

Requisitos de la muestra: 1 ml de reactivo TRIzol® por cada 6 cm de plato de cultivo

[ARN] (mg/ml) = A260 * 40

Se recomienda un coeficiente de A260/A280 = 1.6 – 1.8

8 reacciones de transcripción inversa (RT) por muestra de ARN

Preparación de ADNc

Descargar la plantilla de ejecución

Tipo de experimento: Curva estándar

Configuración de 384 pocillos

Configuración de 96 pocillos

Analice los datos del panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® utilizando el intuitivo software de análisis.

Inicie sesión en el software de análisis Scorecard™ de hPSC.

ESC/iPSC sin diferenciar

ESC/iPSC diferenciadas: Cuerpos embrioides (semana 1) o células directamente diferenciadas.

Requisitos de la muestra: >1 x 106 células/muestra

Aislamiento de ARN

 

 Fórmulas

Extracción de fase orgánica TRIzol®

Requisitos de la muestra: 1 ml de reactivo TRIzol® por cada 6 cm de plato de cultivo

[ARN] (mg/ml) = A260 * 40

Se recomienda un coeficiente de A260/A280 = 1.6 – 1.8

8 reacciones de transcripción inversa (RT) por muestra de ARN

Preparación de ADNc

Descargar la plantilla de ejecución

Tipo de experimento: Curva estándar

Configuración de 384 pocillos

Configuración de 96 pocillos

Analice los datos del panel Scorecard™ de hPSC TaqMan® utilizando el intuitivo software de análisis.

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