纯度选择指南

为了适合不同的实验要求,您可以选用以下不同的纯化方法:

应用 建议纯化方法(保证最小纯度)

常规PCR/RT-PCR

脱盐

测序

脱盐

RT-PCR的第一条链cDNA合成

脱盐

PCR,引物的关键在于5'序列 (如限制性酶切位点)

高亲和纯化/TON纯化

指定位点突变

高亲和纯化/TON纯化

合成文库时的第一条链cDNA合成

高亲和纯化/TON纯化

克隆接头的产生

高亲和纯化/TON纯化

凝胶迁移分析

高亲和纯化/TON纯化

GeneTrapper筛选

PAGE

PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等

PAGE

全基因合成

建议用PAGE,熟悉后再考虑试用其他纯化方式

各种纯化方式的特点:

纯化方法 描述优点

脱盐(DSL)

通过在高纯氨气水蒸汽混合物的气相氨解环境下将连接在CPG上的引物切割洗脱下来, 能有效地去除盐分,但不能有效去除比目的片段短的小片段 。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis)纯度大于45%。

高亲和纯化/TON纯化

基于特异和反相层析法,从合成好的产物中去除失败序列,提供最终的目标序列。适于35个碱基以下的引物。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis)纯度大于75%。

聚丙烯酰胺电泳(PAGE)

利用不同长度序列DNA在凝胶中迁移率不同来分离目标序列和失败序列,从而提供高纯度的目标引物。 对长链Oligo DNA (大于40 mer)的纯化特别有效。 毛细管电泳(Capillary Electrophoresis)纯度大于85%。

高效液相(HPLC)

高效液相(HPLC)利用DNA片段大小和带电电荷的不同来分离纯化引物,是一种广泛使用且非常有效的纯化方式,能达到很高的纯度和灵敏度,特别适合40个碱基以下的引物,毛细管电泳(Capillary Electrophoresis)纯度大于85%。