Lipofectamine® MessengerMAX™是您的通行证

mRNA转染试剂闪亮登场,适用于神经元和原代细胞类型,转染效率可达DNA试剂5倍。

  • 在处理神经元和原代细胞类型时具有惊人的转染效率
  • 更快地表达蛋白质,无基因组整合风险
  • 使用mRNA CRISPR时可获得高达10倍的切割效率

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精选应用说明:神经生物学转染指南

神经生物学领域在快速发展,研究者们在关乎人类健康的诸多方面提出了很多新的见解,包括记忆、情绪失调、衰老和疾病。随着神经生物学领域越来越多地使用生理学相关的模型,如原代神经元和小型动物模型,对于出色的核酸导入工具的需求快速增长。请下载该指南以助您完成研究。

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研究者反馈

"Lipofectamine® MessengerMAX™ reagent can transfect mesenchymal stem cells at high efficiency wiithout the toxic effects of viral vectors." Dr. Daniel Cohen, University of Pennsylvania

"I tested the MessengerMAX on rat pancreatic primary alpha and beta cells, using a positive control eGFP. The expression worked perfectly. I then checked my target gene expression and it increased by more than 1000 fold!" (see data) Dr Mounia Heddad-Masson, Hospital of Geneva (diabetology dpt.)

为了生成mRNA转录物,我们推荐采用以下转录试剂盒:

为了确保转染结果的有效性,我们强烈推荐您使用阳性对照mRNA(可从包括TriLink BioTechnologies在内的第三方供应商处订购),如EGFP mRNA。   


在转染神经元和原代细胞类型时具有惊人的转染效率

Lipofectamine® MessengerMAX™ mRNA转染试剂可以在神经元和各种原代细胞中达到极高的转染效率,从而改善了下游应用结果,且能够应用于更多生物学相关的研究。这是由于我们全新的脂质纳米微粒技术经过优化,可以提供最高的mRNA量,且避免了DNA转染所需的入核步骤。

图1.在转染原代细胞(新鲜分离的小鼠皮层神经元、BJ成纤维细胞和原代角质细胞)时,Lipofectamine® MessengerMAX™性能优于业内领先的DNA和mRNA转染试剂。Lipofectamine® MessengerMAX™和业内领先的mRNA转染试剂用于在24孔板中输送GFP mRNA (500 ng/孔)。其中,领先的DNA转染试剂用于输送GFP DNA (500 ng/孔),GFP在转染后24小时进行分析。

图2.Lipofectamine® MessengerMAX™在转染不同干细胞(Gibco® iPSC、H9 ESC、mESCs, hNSCs)时性能优于其它业内领先的DNA和mRNA转染试剂。在本实验中,Lipofectamine® MessengerMAX™和领先的mRNA转染试剂用于在48孔板中输送GFP mRNA (250 ng/孔)。其中,领先的DNA转染试剂用于输送GFP DNA (250 ng/孔),GFP在转染后24小时进行分析。

图3.Lipofectamine® MessengerMAX™在处理非常难转染的细胞系(bEnd.3、SH-SY5Y、SK-N-SH、A431、RAW 264.7和 HT29)时性能优于其它业内领先的DNA和mRNA转染试剂。在本实验中,Lipofectamine® MessengerMAX™和领先的mRNA转染试剂用于在24孔板中输送GFP mRNA (500 ng/孔)。其中,领先的DNA转染试剂用于输送GFP DNA (500 ng/孔),GFP在转染后24小时进行分析。


Lipofectamine® MessengerMAX™验证过的细胞

细胞类型 Lipofectamine® MessengerMAX™转染效率(%)
MDA-MB-231
A431
A549
bEnd.3
BJ fibroblast
H9 ESCs
Primary hepatocytes
Hep G2
HT-29
iPSCs
Primary keratinocytes
L929
LNCaP
hNSCs
MCF7
Neuro-2a
Primary neurons
RAW 264.7
RBL
SK-N-SH
SH-SY5Y

转染效率 (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%


更快地表达蛋白质,无基因组整合风险

使用Lipofectamine® MessengerMAX™进行mRNA转染通常能使蛋白质更快地表达,并在转染细胞中表现出很高的均一性。此外,mRNA输送无需进入细胞核(第四步),这就消除了基因组整合的风险,使转染效率不再依赖细胞周期。

图 4. DNA与mRNA转染对比.


只需1-2-3三步,轻松上手!

1

制备DNA模板

制备带T7启动子的DNA模板。您可以选择使用Gateway® pcDNA™-DEST40载体克隆基因,或者用包含T7的引物对其进行PCR扩增。

2

生成mRNA

使用mMESSAGE mMACHINE® T7 ULTRA Transcription试剂盒转录模板DNA,合成用于转染的mRNA。

3

转染mRNA

采用简单的Lipofectamine® MessengerMAX™ 转染实验方案转染mRNA。

下载Lipofectamine® MessengerMAX™操作手册

图5.mRNA工作流程


使用mRNA CRISPR获得高达十倍的切割效率

Lipofectamine® MessengerMAX™ 试剂通过高效转染提高了GeneArt® CRISPR 核酸酶mRNA 的剪切和重组效率,可以使基因修饰的效率最大化并简化下游过程。

图 6. 靶向Gibco® iPS细胞中的HPRT位点的各种GeneArt® CRISPR产品的剪切效率 (使用12孔板)。 采用Lipofectamine® 3000试剂输送CRISPR核酸酶一体式质粒DNA;采用Lipofectamine® MessengerMAX™ 和两种业内领先的mRNA输送试剂输送all-RNA CRISPR (Cas9 mRNA + IVT gRNA)。转染72小时后使用GeneArt® 基因组剪切检测试剂盒测定剪切效率。

仅限研究用途,不可用于诊断操作。