经优化的HSC自动检测方法

这一可靠的、自动化检测方法鉴别由内皮细胞形成的血管发生管(微毛细管)并提供有关血管发生管形成的定量测量,例如管的数量、形态和分叉,并提供一个血管生成指数(被血管发生管连接的图像面积百分比X10)。这一检测可以使用单一荧光标记(例如鬼笔环肽藕合物或用于固定细胞的Invitrogen公司™CellMask™染色)识别血管发生管,或者也可以使用额外的通道标记细胞核或目标特异性蛋白。

经典的血管生成实验设置

使用合适的标记物,既可以检测固定后的细胞,也可检测活细胞。

成像模式

  • 广角或共聚焦
  • 5倍放大倍率

自动测量的内容

  • 连接管百分比
  • 平均连接管面积
  • 平均连接宽度
  • 平均连接管节点间距
  • 血管生成指数

血管生成检测图像

HUVEC cells, grown in Matrigel support and treated with angiogenic compounds and imaged at 5x magnification. (Left) Cell nuclei are stained with Invitrogen Molecular Probes Hoechst 33342 (shown in red) and the cytoskeleton (actin fibers) is stained using a phalloidin conjugate (shown in green/yellow; wide choice of labels). (Right) Angiogenesis features identified using Thermo Scientific HCS Studio Software. In a two-channel assay, connected tubes are automatically identified using a blue overlay, and branching nodes are displayed as pink spots. Multiple parameters can be automatically measured in additional detection channels and correlated with the identified tube structures.

HCS angiogenesis assay image
HUVEC细胞,由Matrigel™支持生长,经血管生成化合物刺激,使用5X放大倍率成像。(左侧)细胞核使用Invitrogen™ Molecular Probes™ Hoechst™ 33342(显示为红色)染色,细胞骨架(肌动蛋白纤维)使用一种鬼笔环肽藕合物(显示为绿/黄色;可选多种标记)染色。(右侧)使用Thermo Scientific™ HCS Studio™软件识别血管生成特征。在双通道实验中,连接管自动由蓝色图层所识别,分叉节点显示为粉色小点。使用额外通道可以自动检测多种参数,并将其与识别出的血管生成管结构相关联。

Sample experimental data

Suramin serves as a potent inhibitor of angiogenesis. A dose-response for suramin concentration can be plotted against a variety of properties measured automatically using Thermo Scientific ArrayScan VTI with Thermo Scientific HCS Studio software and plotted using GraphPad Prism software.