Представляем мощный и универсальный трансфекционный реактив для трудно поддающихся трансфекции клеток. Получите возможность проводить биологически значимые эксперименты с интересующими Вас клетками при помощи набора, обеспечивающего:

  • Высокую производительность—беспрецедентную эффективность работы с широчайшим спектром как обычных, так и трудно поддающихся трансфекции клеток
  • Повышенную жизнеспособность клеток—мягкое воздействие на клетки с низкой токсичностью
  • Универсальность—один и тот же набор для трансфекции ДНК, РНК и котрансфекции

Скачать статью о применении реактива

Мы с удивлением и радостью обнаружили, что реактив Lipofectamine® 3000 обеспечивает более чем в 10 раз повышенную эффективность трансфекции при работе с трудно поддающимися трансфекции клетками. Кроме того, наблюдалось снижение смертности клеток. Прекрасные результаты!
—Руи Эдуардо Кастро, доктор наук Лиссабонского университета.

Высокая эффективность при работе с широчайшим спектром клеток, трудно поддающихся трансфекции

При создании реактива Lipofectamine® 3000 были использованы самые современные нанотехнологии, обеспечивающие высокую эффективность трансфекции и воспроизводимость результатов Lipofectamine® 3000 обеспечивает исключительную эффективность трансфекции при работе с широчайшим спектром как обычных клеток, так и клеток, трудно поддающихся трансфекции (Рис. 1), при этом жизнеспособность клеток повышается.



Фиг. 1. Реактив Lipofectamine® 3000 по эффективности превосходит реактивы Lipofectamine® 2000 и FuGENE® HD. Каждый из этих реактивов использовали для трансфекции клеточных линий HEK 293, HeLa, LNCaP, HepG2, и A549 в формате 96-луночных плашек и спустя 48 часов исследовали экспрессию GFP. Для всех пяти клеточных линий Lipofectamine® 3000 показал более высокую эффективность трансфекции по сравнению с реактивами Lipofectamine® 2000 и FuGENE® HD.

  Рисунок 2. Вестерн блот, демонстрирующий экспрессию белка GST-STAT в клеточной линии HepG2. Клетки были трансфецированы плазмидой GST-STAT с помощью реактивов Lipofectamine® 2000, Lipofectamine® 3000, FuGENE® HD (competitor 1) и X-tremeGENE® HP (competitor 2) в 24-луночных плашках. Спустя 48 часов клетки проанализировали с помощью вестерн блоттинга. Контрольный блот с β-актином подтвердил, что все четыре образца были загружены на гель в одиноковом количестве.


Повышенная жизнеспособность клеток, низкая токсичность


При разработке Lipofectamine® 3000 мы оптимизировали все четыре шага процесса трансфекции и объединили наши самые современые нанотехнологии. Высокая производительность трансфекции позволяет снизить количество реактива и, таким образом, уменьшить потенциальную токсичность для клеток.

  Фиг. 3. Каждый из реактивов использовали для трансфекции клеток HeLa вектором экспрессии зеленого флуоресцентного белка (GFP) на 96-луночных плашках в указанных дозах. Анализ проводили через 48 часов с помощью проточной цитометрии для определения процента эффективности трансфекции и интенсивности экспрессии GFP. Реактив Lipofectamine® 3000 продемонстрировал более высокие результаты эффективности трансфекции и интенсивности экспрессии, по сравнению как с реактивом Lipofectamine® 2000, так и с реактивом Lipofectamine® LTX.


Таблица 1. При тестировании на разных клеточных линиях реактив Lipofectamine® 3000 всегда демонстрирует более высокую эффективность трансфекции по сравнению с реактивом Lipofectamine® 2000.

Тип клеток Эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 Порядок повышения экспрессии белка фолдинга. Реактив Lipofectamine® 3000 в сравнении с реактивом Lipofectamine® 2000
3T3 4
4T1 2
A431 2
A549 3
ACHN 2
bEnd.3 9
BJ 3
BT-549 4
C2C12 3
C6 5
Caco-2 2
Caki-1 4
CHO-K1 1
CHO-S 1
COLO 205 4
COS-7 4

Эффективность трансфекции (%): <30%     30-50%    51-79%    >80%

Тип клеток Эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 Порядок повышения экспрессии белка фолдинга. Реактив Lipofectamine® 3000 в сравнении с реактивом Lipofectamine® 2000
DU 145 2
H460 3
H9C2 3
HCC1937 5
HCT116 1
HEK 293 2
HeLa 3
Hep 3B 2
Hepa 1-6 1
Hep G2 9
Hs 578.T 3
cHT29 1
Huh-7 4
Jurkat 1

Эффективность трансфекции (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

Тип клеток Эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 Порядок повышения экспрессии белка фолдинга. Реактив Lipofectamine® 3000 в сравнении с реактивом Lipofectamine® 2000
K-562 1
L6 8
L929 2
LNCaP 6
MCF 10A 5
MCF7 2
MDA-MB-231 3
MDA-MB-435 1
MDA-MB-468 9
MDCK 1
N-2a 1
NCI-H23 2
NCI-H460 17
P19 1
PANC-1 3
PC-12 2

Эффективность трансфекции (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

Тип клеток Эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 Порядок повышения экспрессии белка фолдинга. Реактив Lipofectamine® 3000 в сравнении с реактивом Lipofectamine® 2000
RAW 4
RBL 2
RD 4
Saos-2 4
SH-SY5Y 1
SK-BR-3 4
SK-MEL-28 2
SK-N-SH 6
SK-OV-3 3
SW480 2
SW620 5
T98G 4
U2OS 3
U937 2
Vero 1

Эффективность трансфекции (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%


Усовершенствуйте методы исследования рака


Используя биологически значимые клеточные линии вы получите достоверные ответы на вопросы вашего эксперимента. Широкий спектр применения и высокая эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 позволит Вам проявить максимальную гибкость при выборе клеточной линии. Реактив Lipofectamine® 3000 демонстрирует значительное повышение эффективности трансфекции по сравнению с лидирующими в отрасли реактивами, такими как Lipofectamine® 2000, для раковых клеток, полученных из разных тканей. В то время как только 25% данных клеточных линий можно считать легко поддающимися трансфекции с помощью Lipofectamine® 2000 (эффективность трансфекции >50%), при использовании Lipofectamine® 3000 количество легко поддающихся трансфекции клеток составляет 60%.

Таблица 2. При тестировании на раковых клеточных линиях реактив Lipofectamine® 3000 демонстрирует более высокую эффективность трансфекции по сравнению с реактивом Lipofectamine® 2000.

Раковая клеточная линия Эффективность трансфекции реактива Lipofectamine® 3000 Повышение экспрессии белка фолдинга. Реактив Lipofectamine® 3000 в сравнении с реактивом Lipofectamine® 2000
Hs 578.T 3
SW480 2
SK-MEL-28 2
4T1 2
RD 4
Saos-2 4
PANC-1 3
NCI-H23 2
BT-549 4
L6 8
SK-OV-3 3
DU 145 2
HCC1937 5
SW620 5
MDA-MB-468 9
NCI-H460 17
Caki-1 4

Эффективность трансфекции (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

  Рисунок 4. Реактивы Lipofectamine® 2000 и Lipofectamine® 3000 применяли для трансфекции 17 клеточных линий GFP-экспрессирующей плазмидой на 24 луночных плашках, используя 0,5 мкг плазмиды на лунку и следуя рекомендованным протоколам для каждого реактива. Спустя 48 часов анализировали экспрессию GFP. Каждый эксперимент проводили в трех повторах; точки обозначают среднюю эффективность трансфекции + среднеквадратичное отклонение.


Усовершенствуйте результаты редактирования генома


Реактив Lipofectamine® 3000 был разработан для того, чтобы повысить планки эффективности новых технологий, таких как геномная инженерия, для биологически значимых систем. С помощью данного реактива GeneArt® TALs и CRISPR способны встраиваться в локус AAVS1 в клетках HepG2 и U2OS. Реактив совершенствует эффективность трансфекции, среднюю интенсивность флуоресценции и геномную рестрикцию. Данные преимущества уменьшают объемы работ на последующих кропотливых стадиях эксперимента, обеспечивают легкость работы со стволовыми клетками и улучшают сайт-специфичное встраивание трансгенов в клеточный геном.

Скачать статью о применении реактива >



Рисунок 5. Эффективность рестрикции GeneArt® TALs и CRISPRs. Мишенью для TALs и CRISPRs служил локус AAVS1 в клеточных линиях (А) U2OS и (В) HepG2. Анализ эффективности рестрикции проводилось с помощью набора GeneArt® Genomic Cleavage Detection Kit.



Рисунок 6. Анализ эффективности трансфекции и белковой экспресии с помощью вектора CRISPR. Верктор содержал репортерный ген OFP и был трансфецирован в клеточные линии (A) U2OS и (B) HepG2 с помощью реактивов Lipofectamine® 2000 и Lipofectamine® 3000. На гистограмме показана экспрессия репортерного гена; изображения демонстрируют флуоресценцию соответствующих клеток, в экспрессирующих OFP.


*Продукт является бесплатным. Данная акция доступна только для научных сотрудников, работающих в сфере естественных наук, в Армении, Азербайджане, республике Беларусь, Грузии, Казахстане, Кыргызстане, Молдавии, России, Таджикистане, Туркменистане, на Украине и в Узбекистане. Запросы на образцы должны быть отправлены не позднее 31 декабря 2014 г., или до того, как поставки образца будут завершены, в зависимости от того, что наступит ранее. Акция распространяется на 0,1 мл образца реактива Lipofectamine® 3000. Для каждого клиента предоставляется не более одного бесплатного образца. Данная акция не распространяется на медицинских работников. Получая образец от Life Technologies, Вы гарантируете, что данное действие не противоречит правилам Вашей организации, Вашему контракту и закону, и что Ваш работодатель полностью осведомлен о Ваших действиях и дал согласие на получение Вами бесплатного образца от Life Technologies. Данная акция не работает в сочетании с другими акциями и скидками. Предложение является недействительным в тех случаях, когда оно запрещено, лицензировано или ограничено федеральным, штатным, провинциальным или местным законом или правилами агентства/политикой института. Также могут применяться и другие ограничения.

Источники

Связаться с нами

Чтобы узнать больше, пожалуйста, свяжитесь с авторизованным дистрибьютером Life Technologies: www.lifetechnologies.com/contactus

Natalia Novozhilova, Ph.D.
Наталья Новожилова, к.х.н.
T: +7(495) 651 6797
M: +7(985) 767 0086
Email: natalia.novozhilova@thermofisher.com