什么是qPCR？

qPCR代表定量聚合酶链式反应这是一种利用PCR测量DNA的技术。

PCR与qPCR

大多数聚合酶链式反应的应用侧重于其作为将少量DNA扩增为大量DNA的方法。这对于凝胶电泳和大多数DNA测序形式来说是必要的。但这也限制了PCR所能提供的信息量。它通常被视为另一种测量中的一个步骤，而不是自身的一种工具。

定量PCR在标准PCR流程中增加了两个要素：

这两个要素使得qPCR从其他程序中的一个处理步骤，转变为一种独立的测量技术。

用于qPCR的热循环仪配备了荧光计，以检测荧光信号。

荧光计在热循环仪运行过程中实时检测荧光，并在PCR扩增过程中持续提供读数。

因此，定量PCR也被称为real time PCR。

结合适当的标准曲线和参考值，这些关于反应速率和时间的实时信息可以转化为有关DNA相对和绝对含量的信息。

qPCR最重要的优势之一是能够测量基因表达。

基因表达，即mRNA合成，是蛋白质合成的重要环节。基因表达是分子生物学家积极研究的领域，有助于理解众多生物通路和疾病。研究人员利用逆转录酶将样品中的RNA转录为互补DNA（cDNA），然后用该cDNA进行qPCR实验。

这一过程称为逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。

最终获得的数据提供了有关原始未逆转录样品中难以直接测量的mRNA含量的信息。

qPCR运行所生成的数据类型在很大程度上取决于所使用的引物和染料。

通常，一次qPCR只收集一个基因的数据，因为qPCR中使用的染料通常是非特异性的，如果在同一混合物中使用多个引物，会将多个基因合并为一个读数。然而，如果使用荧光DNA探针而不是染料，就可以实现qPCR的“多重检测”，并测量多个DNA目标，只要每个目标对应的探针在不同频率下发出荧光即可。

如需了解更多关于qPCR应用、理论与实践的信息，请访问我们的‘Ask TaqMan’资源中心。