Por Amanda Maxwell
Os membros do setor de alimentos geralmente estão em uma posição ideal na linha de frente da fabricação e do processamento para garantir as melhores práticas de segurança alimentar. Essa responsabilidade aumenta quando se trata de produtos como a fórmula infantil em pó (PIF), em que a contaminação por patógenos de doenças transmitidas por alimentos (FBD) com micróbios como as espécies Cronobacter e Salmonella pode ser extremamente prejudicial para essas populações vulneráveis. Muitos produtores usam fluxos de trabalho de detecção microbiana, como a linha de ensaios de PCR Thermo Scientific™ SureTect™, para oferecer uma triagem rápida e eficiente. Essas triagens aumentam a confiança do consumidor e melhoram a reputação do setor, e a inovação da pesquisa no desenvolvimento de ensaios também ajuda a enfatizar as boas práticas de laboratório (GLP) para reduzir a produção de resíduos perigosos.
As espécies deCronobacter, inclusive a antiga Enterobacter sakazakii (atualmente C. sakazakii), são encontradas naturalmente no meio ambiente. O Cronobacter pode se desenvolver em alimentos secos, como PIF, chás de ervas, leite em pó e amidos. As pessoas portadoras desse micróbio geralmente não apresentam sintomas, mas em populações vulneráveis, como bebês (especialmente neonatos), pacientes imunocomprometidos e idosos, a infecção causa meningite, enterocolite necrosante, bacteremias e septicemia. Nesses grupos, a infecção pode ser fatal ou causar danos permanentes.
Bebês prematuros e recém-nascidos são particularmente vulneráveis ao Cronobacter. Como esses bebês são frequentemente atendidos em unidades de cuidados com bebês e alimentados com fórmula por sonda, é fundamental que os fabricantes de PIFs testem os patógenos de FBD.
Os protocolos de teste para patógenos de FBD geralmente envolvem fluxos de trabalho moleculares, como ensaios de PCR (reação em cadeia da polimerase) que identificam o DNA microbiano para detectar a contaminação. Após um resultado positivo de DNA, o teste de segurança exige a identificação positiva por um método estabelecido baseado em cultura para determinar a viabilidade do patógeno. Portanto, é importante que a preparação da amostra em qualquer fluxo de trabalho microbiano que os fabricantes usem nos testes de segurança alimentar não comprometa a viabilidade e que os resultados possam ser lidos com confiança.
Ao testar espécies de Cronobacter em PIF, é importante garantir que os resultados reflitam a presença de organismos viáveis, mesmo em níveis baixos, que possam causar doenças. Como os ensaios de PCR relatam o DNA microbiano independentemente da viabilidade, o teste baseado em cultura é importante para estabelecer a segurança do produto.
Os métodos de referência que testam o Cronobacter incluem uma etapa de enriquecimento para aumentar os números microbianos até os níveis de detecção antes do teste. Uma complicação adicional para os protocolos de segurança de PIF é que os fabricantes geralmente incluem organismos probióticos em suas formulações para promover a saúde intestinal e reduzir os patógenos de FBD. Durante a preparação da amostra e a cultura em meio de enriquecimento, esses organismos probióticos também se multiplicam. Isso pode diminuir o pH do enriquecimento durante a incubação, o que pode matar os organismos-alvo. A PCR ainda detecta o DNA desses organismos não viáveis, mas a cultura padrão para confirmar o resultado positivo não consegue identificar colônias patogênicas.
Para superar esse efeito de mascaramento durante a etapa de enriquecimento, o método de referência padrão para detecção de espécies de Cronobacter em PIF, ISO 22964:2017, exige a adição de vancomicina para inibir o crescimento de cepas probióticas e manter um pH adequado para a viabilidade das espécies de Cronobacter. No entanto, para as BPL, é aconselhável neutralizar os meios de cultura contendo antibióticos antes do descarte ou colocá-los apenas no fluxo de resíduos perigosos.
No entanto, um estudo recente realizado por cientistas da Thermo Fisher Scientific mostrou que a vancomicina não é necessária durante o enriquecimento se o produto PIF não contiver probióticos. Os cientistas compararam o fluxo de trabalho do ensaio de PCR Thermo Scientific™ SureTect™ Cronobacter para a detecção de espécies de Cronobacter com o método de referência padrão, omitindo a vancomicina do meio de enriquecimento antes da análise de PCR.
Ao coletar 300 g de amostras (27 PIF; 3 de leite em pó) com baixos níveis de espécies de Cronobacter danificadas por dessecação, a equipe encontrou uma boa concordância entre os dois métodos. Como os resultados mostram que o desempenho do método SureTect Cronobacter PCR Assay foi comparável ao método de referência, os laboratórios de segurança alimentar não precisam adicionar vancomicina ao meio de enriquecimento ao testar Cronobacter em PIF e leite em pó que não contêm probióticos.
Leia mais sobre o teste de fórmulas infantis nesta Nota de Aplicação: Detecção de Cronobacter em fórmulas infantis em pó não probióticas e leite em pó.
Referências
Cahill, S.M., et al. (2008). “Powdered infant formula as a source of Salmonella infection in infants,” Clinical Infectious Diseases 15, 46, pp. 268-273, doi: 10.1086/524737, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18171262
CDC, Infecção por Cronobacter em bebês, https://www.cdc.gov/features/cronobacter/index.html
ISO 22964:2017 Método horizontal para a detecção de Cronobacter spp. https://www.iso.org/standard/64708.html
Meyer, E.L., et al. (2017). “Sua instituição está descartando meios de cultura que contêm antibióticos?” Applied Biosafety: Journal of ABSA International, 22, pp. 164-167, https://journals.sagepub.com/doi/pdf/10.1177/1535676017735521
Autor da postagem: Alyssa Gonzalez.
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