{"id":2790,"date":"2025-09-23T23:00:00","date_gmt":"2025-09-24T05:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/www.thermofisher.com\/blog\/cienciaacelerada\/?p=2790"},"modified":"2025-09-03T19:33:19","modified_gmt":"2025-09-04T01:33:19","slug":"porque-necesita-un-espectrometro-de-masas-de-clase-de-verificacion","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.thermofisher.com\/blog\/cienciaacelerada\/cromatografia-avanzada\/porque-necesita-un-espectrometro-de-masas-de-clase-de-verificacion\/","title":{"rendered":"Por qu\u00e9 necesita un espectr\u00f3metro de masas de clase de verificaci\u00f3n: m\u00e1s all\u00e1 de las 4 dimensiones para mejorar el rendimiento anal\u00edtico en an\u00e1lisis cuantitativo dirigido"},"content":{"rendered":"
\"Ciencia<\/a><\/div>\n\n\n

Por Dr. Scott Peterman, Gerente Senior de Marketing de Producto, Espectrometr\u00eda de Masas en Ciencias de la Vida, Thermo Fisher Scientific\u00a0<\/p>\n\n\n\n

Parte 4: M\u00e1s all\u00e1 de las 4 dimensiones para mejorar el rendimiento anal\u00edtico en an\u00e1lisis cuantitativo dirigido<\/strong>
<\/strong> Esta es la cuarta entrega de una serie de blogs que destacan los atributos clave y los impresionantes beneficios del espectr\u00f3metro de masas Thermo Scientific\u2122 Stellar\u2122, el primer instrumento de su tipo dise\u00f1ado y optimizado para cuantificaci\u00f3n dirigida altamente multiplexada, ideal para verificaci\u00f3n de descubrimientos. Al ofrecer m\u00e9todos anal\u00edticos robustos y tiempos de respuesta significativamente mejorados, esta soluci\u00f3n ayuda a los laboratorios a aumentar su capacidad y diferenciarse, generando as\u00ed mayores ingresos. Para conocer m\u00e1s antecedentes, consulte la Parte 1<\/a>, Parte 2<\/a> y Parte 3<\/a> de esta serie, y permanezca atento a futuras publicaciones en nuestro sitio web.<\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de las 4 dimensiones para mejorar el rendimiento anal\u00edtico en an\u00e1lisis cuantitativo dirigido<\/strong><\/p>\n\n\n\n

La especificidad anal\u00edtica es uno de los requisitos m\u00e1s cr\u00edticos para un an\u00e1lisis cuantitativo dirigido exitoso. Asignar los datos medidos a iones producto diagn\u00f3sticos del analito de inter\u00e9s aumenta la confianza en la medici\u00f3n resultante al determinar el nivel de expresi\u00f3n, n\u00famero de copias o cantidad absoluta de un analito en cada muestra, as\u00ed como en todo el estudio. El uso de valores determinados emp\u00edricamente para cromatograf\u00eda l\u00edquida (LC) y espectrometr\u00eda de masas (MS) proporciona informaci\u00f3n espec\u00edfica que, en conjunto, mejora el procesamiento de datos. Esta informaci\u00f3n ortogonal incluye: 1) tiempos de retenci\u00f3n y formas de pico cromatogr\u00e1ficos; 2) valor m\/z del precursor; 3) iones producto MS\/MS; y 4) perfiles de distribuci\u00f3n de iones producto MS\/MS, que pueden almacenarse en bibliotecas espectrales utilizadas no solo para procesar datos LC-MSn, sino tambi\u00e9n para construir m\u00e9todos de adquisici\u00f3n dirigidos con alta confianza.<\/p>\n\n\n\n

Determinaci\u00f3n de par\u00e1metros 4D: \u00bfes suficiente?<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Publicaciones anteriores destacaron el uso de par\u00e1metros en cuatro dimensiones (4D) para crear y procesar datos dirigidos y no dirigidos con confianza. Usando LC acoplada a un espectr\u00f3metro de masas QTOF con movilidad i\u00f3nica atrapada (timsTOF), cada analito se anota por medio de cuatro mediciones emp\u00edricas en todas las muestras del estudio: 1) tiempo de retenci\u00f3n medido; 2) movilidad i\u00f3nica como medida de su secci\u00f3n transversal de colisi\u00f3n (CCS); 3) valor m\/z del precursor; y 4) presencia de iones producto correspondientes. Se asume que la selectividad ortogonal lograda mediante la separaci\u00f3n UHPLC y la resoluci\u00f3n de movilidad i\u00f3nica es suficiente para diferenciar un analito espec\u00edfico de iones isob\u00e1ricos e isom\u00e9ricos coeluyentes, y que los iones producto resultantes se atribuyen solo al precursor aislado. Agregar valores de CCS puede ayudar a compensar cierta variabilidad<\/a>, pero requiere mayor trabajo del investigador para determinar con precisi\u00f3n la varianza asociada a la movilidad i\u00f3nica. En ning\u00fan punto se emplean las relaciones de iones producto<\/strong> como una dimensi\u00f3n adicional para verificaci\u00f3n<\/a>.<\/p>\n\n\n\n

Un complemento inteligente: determinaci\u00f3n de relaciones de iones producto<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Sin embargo, la determinaci\u00f3n de relaciones de iones producto ha sido el est\u00e1ndar de oro para an\u00e1lisis cualitativo en adquisiciones SRM\/MRM durante d\u00e9cadas. A pesar de que los m\u00e9todos cuantitativos en espectr\u00f3metros de masas de triple cuadrupolo adquieren datos de solo dos o tres transiciones de iones producto, la inclusi\u00f3n de las relaciones entre estos iones se utiliza para verificar cualitativamente que la se\u00f1al medida corresponde al analito de inter\u00e9s. Este concepto ha sido incorporado en los estudios de cuantificaci\u00f3n dirigida realizados con el espectr\u00f3metro de masas Thermo Scientific Stellar\u2122, aumentando significativamente el rendimiento anal\u00edtico para una amplia gama de mol\u00e9culas.<\/p>\n\n\n\n

Para mejorar la selectividad y especificidad cuantitativa necesaria para una adquisici\u00f3n confiable de datos, la soluci\u00f3n propuesta combina las capacidades de separaci\u00f3n cromatogr\u00e1fica del sistema Thermo Scientific\u2122 Vanquish\u2122 UHPLC con la innovadora adquisici\u00f3n PRM del Stellar\u2122, y va m\u00e1s all\u00e1 de la confianza en el procesamiento de datos. Adicionalmente, se aprovecha una adquisici\u00f3n de datos inteligente que permite alineaci\u00f3n de tiempo de retenci\u00f3n (RT), reduciendo la necesidad de aplicar pasos adicionales de procesamiento posterior. Este blog analiza la diferenciaci\u00f3n en cada uno de estos pasos, al tiempo que presenta una quinta dimensi\u00f3n<\/strong> importante: la ampliaci\u00f3n del an\u00e1lisis PRM hasta el nivel MS3.<\/p>\n\n\n\n

Dimensi\u00f3n 1: Aprovechamiento de UHPLC de 1.500 bar para selectividad ortogonal<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Con los sistemas Thermo Scientific Vanquish\u2122 Neo y Horizon UHPLC, los investigadores pueden aprovechar capacidades de alta presi\u00f3n que cubren un rango desde flujo nano hasta flujo anal\u00edtico, lo que incrementa la capacidad de pico y mejora la tasa de utilizaci\u00f3n frente a sistemas HPLC limitados a 1.000 bar. Los sistemas Vanquish tambi\u00e9n garantizan un rendimiento reproducible a lo largo de estudios prolongados, como los de salud poblacional.<\/p>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de la primera dimensi\u00f3n:<\/strong> La rutina Adaptive RT permite asignar valores reales de tiempo de retenci\u00f3n a cada analito con ventanas m\u00e1s estrechas. Funciona para mol\u00e9culas peque\u00f1as y grandes, desde an\u00e1lisis de c\u00e9lula \u00fanica hasta an\u00e1lisis a granel, y conecta m\u00e9todos entre gradientes largos de descubrimiento y gradientes r\u00e1pidos de cuantificaci\u00f3n dirigida, sin requerir est\u00e1ndares de RT a\u00f1adidos. La alineaci\u00f3n de RT se realiza durante la adquisici\u00f3n<\/strong>, no en el procesamiento posterior.<\/p>\n\n\n\n

Dimensi\u00f3n 2: Introducci\u00f3n de analitos dirigidos<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Luego de la separaci\u00f3n UHPLC y la ionizaci\u00f3n, los analitos dirigidos (precursores) ingresan al MS y atraviesan la trayectoria i\u00f3nica hasta el detector. El filtro de masas cuadrupolar (Q1) transmite un rango estrecho de m\/z centrado en el valor m\/z del precursor. Este rango suele ser de 1 a 2 Th, dependiendo del espectr\u00f3metro de masas.<\/p>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de la segunda dimensi\u00f3n:<\/strong> El cuadrupolo QR5 Plus del Stellar\u2122 utiliza varillas hiperb\u00f3licas que mejoran la eficiencia de transmisi\u00f3n i\u00f3nica en un rango m\u00e1s amplio de m\/z. La resoluci\u00f3n unitaria es de 0.7 Th en la base, mucho m\u00e1s estrecha que los 1.2 a 2 Th de otros cuadrupolos, lo que mejora el rendimiento cuantitativo.<\/p>\n\n\n\n

Dimensi\u00f3n 3: Adquisici\u00f3n de datos PRM de m\u00e1s iones producto<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

El Stellar\u2122 adquiere datos PRM en espectros de barrido completo MS2 por cada evento, a diferencia de la adquisici\u00f3n SRM\/MRM. Recoger datos de m\u00e1s iones producto por unidad de tiempo mejora la especificidad de la medici\u00f3n. Adem\u00e1s, permite seleccionar iones espec\u00edficos para cuantificaci\u00f3n durante el procesamiento sin necesidad de modificar el m\u00e9todo experimental ni repetir el an\u00e1lisis.<\/p>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de la tercera dimensi\u00f3n:<\/strong> El Stellar\u2122 combina capacidades \u00fanicas de gesti\u00f3n dual de paquetes i\u00f3nicos con acumulaci\u00f3n externa a la trampa i\u00f3nica, incrementando el rendimiento cuantitativo. Manejar dos paquetes simult\u00e1neamente permite tiempos de acumulaci\u00f3n m\u00e1s largos sin comprometer la tasa de adquisici\u00f3n PRM, esencial para mediciones en niveles LOD y LOQ.<\/p>\n\n\n\n

Dimensi\u00f3n 4: Evaluar relaciones de iones producto mediante espectros MS2 completos<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Como se mencion\u00f3, las relaciones entre iones producto se usan en m\u00e9todos cuantitativos validados para asegurar la selectividad frente a interferencias de matriz o fondo.<\/p>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de la cuarta dimensi\u00f3n:<\/strong> La forma, lugar y m\u00e9todo de acumulaci\u00f3n de iones diferencia la eficacia de cada espectr\u00f3metro. El Stellar\u2122 primero filtra el precursor por m\/z, luego acumula los iones producto en un multipolo de direccionamiento i\u00f3nico\u2014como en los Orbitrap\u2122\u2014maximizando la sensibilidad para iones de baja abundancia. Finalmente, se incorpora AGC din\u00e1mico que ajusta autom\u00e1ticamente el tiempo de acumulaci\u00f3n seg\u00fan el flujo de iones. (Referencia: Plubell et al. BioRxiv<\/a>)<\/p>\n\n\n\n

Dimensi\u00f3n 5: Enfrentando factores que afectan la sensibilidad<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

La cuantificaci\u00f3n dirigida mediante adquisici\u00f3n MS2 puede verse afectada por iones is\u00f3meros\/isob\u00e1ricos coeluyentes. Las opciones son modificar los gradientes LC (reduciendo el rendimiento) o usar MS3. El Stellar\u2122 permite adquisici\u00f3n MS3 con velocidades excepcionales (hasta 40 Hz), manteniendo la capacidad de targets y puntos de datos por pico.<\/p>\n\n\n\n

M\u00e1s all\u00e1 de la quinta dimensi\u00f3n:<\/strong> Adem\u00e1s de su velocidad \u00fanica en MS3, el Stellar\u2122 implementa AGC din\u00e1mico para maximizar calidad espectral en un amplio rango din\u00e1mico y permite usar HCD o CID en cada nivel MSn. La inclusi\u00f3n de Adaptive RT asegura que los m\u00e9todos tMS3 funcionen en gradientes r\u00e1pidos con mayor capacidad de targets.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Por Dr. Scott Peterman, Gerente Senior de Marketing de Producto, Espectrometr\u00eda de Masas en Ciencias de la Vida, Thermo Fisher Scientific\u00a0 Parte 4: M\u00e1s all\u00e1 de las 4 dimensiones para mejorar el rendimiento anal\u00edtico en an\u00e1lisis cuantitativo dirigido Esta es la cuarta entrega de una serie de blogs que destacan los atributos clave y los<\/p>\n","protected":false},"author":1127,"featured_media":2791,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"_kad_blocks_custom_css":"","_kad_blocks_head_custom_js":"","_kad_blocks_body_custom_js":"","_kad_blocks_footer_custom_js":"","_monsterinsights_skip_tracking":false,"_genesis_hide_title":false,"_genesis_hide_breadcrumbs":false,"_genesis_hide_singular_image":false,"_genesis_hide_footer_widgets":false,"_genesis_custom_body_class":"","_genesis_custom_post_class":"","_genesis_layout":"","_jetpack_newsletter_access":"","_jetpack_dont_email_post_to_subs":false,"_jetpack_newsletter_tier_id":0,"_jetpack_memberships_contains_paywalled_content":false,"_jetpack_feature_clip_id":0,"_jetpack_memberships_contains_paid_content":false,"footnotes":"","jetpack_post_was_ever_published":false},"categories":[163,155],"tags":[],"division":[],"class_list":{"0":"post-2790","1":"post","2":"type-post","3":"status-publish","4":"format-standard","5":"has-post-thumbnail","7":"category-clinical-and-toxicology","8":"category-cromatografia-avanzada","9":"entry"},"_selected_authors":[],"_selected_reviewers":[],"acf":[],"yoast_head":"\nPor qu\u00e9 necesita un espectr\u00f3metro de masas de clase de verificaci\u00f3n: m\u00e1s all\u00e1 de las 4 dimensiones para mejorar el rendimiento anal\u00edtico en an\u00e1lisis cuantitativo dirigido - Ciencia Acelerada<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Descubre c\u00f3mo el espectr\u00f3metro de masas Thermo Scientific Stellar revoluciona el an\u00e1lisis cuantitativo. 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