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所有176种内切酶均使用一种统一缓冲液。酶切,就是如此简单。

Thermo Scientific FastDigest限制性内切酶是一种使用统一缓冲液、可实现快速完全DNA酶切的高级内切酶系列产品。凭借30多年的限制性内切酶研究经验,我们的FastDigest快速内切酶已成为用户酶切的最佳选择,可提供176种限制性内切酶,并且可实现酶切反应混合物直接进行上样凝胶电泳。

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176种FastDigest快速内切酶可供选择

在30多年内切酶的研究中,我们积累的限制性内切酶生产菌株库是业内最大的菌株库之一。大量可供选择的同裂酶和卓越的生产能力促使这个包含176种FastDigest限制性内切酶的独特系统的诞生。

30多年的研究经验

  • >>3000种限制性内切酶生产菌株
  • 发现了>30%的现有已知内切酶
  • 克隆了>30%的现有已知内切酶
  • 共有176种FastDigest内切酶可供选择
  • Thermo Scientific FastDigest绿色缓冲液可实现直接上样进行凝胶电泳
  常规限制性内切酶 FastDigest快速限制性内切酶
缓冲体系 多达20种缓冲液 一种通用缓冲液
双/多重酶切 受缓冲液兼容性限制 任意内切酶可自由组合
反应时间 1小时至过夜 5-15分钟
可直接上样至凝胶
下游应用 部分兼容
100%兼容
星号活性
活性定义 在酶的最佳缓冲液中,1单位酶在60分钟内酶切消化1μg的λDNA 在FastDigest缓冲液中,1μL FastDigest内切酶在5至15分钟内酶切消化1μg底物DNA

所有内切酶在统一缓冲液中均具有100%活性

FastDigest绿色缓冲液和FastDigest缓冲液是我们独特的酶切缓冲液,所有FastDigest限制性内切酶在此缓冲液中都具有100%活性。该缓冲体系可选用任意限制酶组合实现双重和多重酶切。无需按顺序酶切或更换缓冲液。

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

5分钟质粒DNA酶切比较:

  • 泳道M: Thermo Scientific GeneRuler Express分子量标准(货号SM1553
  • 泳道1: 对照,未经酶切的质粒DNA
  • 泳道2:FastDigest EcoRI
  • 泳道3:FastDigest EcoRI和FastDigest KpnI
  • 泳道4:FastDigest EcoRI、FastDigest KpnI和FastDigest SmaI

缓冲液与下游应用100%兼容

DNA/RNA修饰酶,如连接酶、磷酸酶、激酶和嗜温DNA聚合酶在FastDigest缓冲液和FastDigest绿色缓冲液中具有100%活性。因此,在下游应用中使用的酶可以直接加到FastDigest反应混合物中。不需要缓冲液更换或纯化步骤。

DNA/RNA 修饰酶 在FastDigest绿色缓冲液/FastDigest缓冲液中的活性
DNA聚合酶I 100%
Klenow 片段 100%
Klenow 片段 (exo-) 100%
T4 DNA 聚合酶 100%
T7 DNA 聚合酶 100%
T4 DNA 连接酶* 75–100%
FastAP 热敏碱性磷酸酶 100%
T4 多聚核苷酸激酶 100%

* T4 DNA连接酶活性需要0.5 mM ATP。

在5-15分钟内完成酶切

使用一种统一缓冲液在5-15分钟内完成双重和多重酶切:

  • 节省时间和精力,提高通量
  • 对于所有种类的DNA模板都提供相应的建议酶切时间(质粒DNA、PCR产物、基因组DNA)。
  • 所有模板都不需要过夜酶切。
  • 反应时间短,无星号活性。
常规限制性内切酶
按顺序酶切
FastDigest限制性内切酶
一种反应混合物
Apal的反应体系配制
 约2分钟
FastDigest ApaI和XhoI的反应体系配制
约2分钟
孵育
60分钟
孵育
Xhol反应体系配制
Xhol的反应构建
约2分钟
孵育
60分钟
总时间
>2 小时
总时间
 7分钟

可实现酶切后直接上样凝胶电泳

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

为了增加使用方便性,我们开发了FastDigest绿色缓冲液,其与FastDigest无色缓冲液具有同样的性能,但可实现将反应混合物直接上样进行凝胶电泳。10X FastDigest绿色缓冲液包含密度试剂和两种示踪染料,从而可以实现直接上样。蓝色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速度与3-5 kb DNA片段的迁移速度接近,并在424 nm时出现激发峰;而黄色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速度快于10 bp DNA片段的迁移速度,并在615nm时出现激发峰。

FastDigest 绿色缓冲液

含有FastDigest绿色缓冲液的反应混合物:

  • 泳道1: 电泳前,加入上样孔中的反应混合物;
  • 泳道2: 电泳后,在凝胶上分离的条带

反应时间短,无星号活性

FastDigest内切酶与FastDigest(绿色)缓冲液结合使用,可消除星号活性:

  • 反应时间短(5-15分钟),无需长时间酶切
  • 通用缓冲液,具有适合所有酶的最佳pH和盐浓度
  • 优化的酶和甘油浓度

常规限制性内切酶具有较长的反应时间、高酶浓度或高甘油浓度、高pH值或低离子强度,因此,可能表现出星号或"松弛"活性。FastDigest内切酶解决了所有这些问题,可在5分钟内实现单重、双重甚至三重酶切,不会出现任何星号活性。

5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切

5分钟内完成质粒DNA的单重和双重酶切,无星号活性

5分钟质粒DNA酶切比较:

  • 泳道1: FastDigest SmaI
  • 泳道2: FastDigest EcoRI
  • 泳道3: FastDigest SmaI和FastDigest EcoRI双酶切
  • 泳道M: GeneRuler 1 kb Plus DNA分子量标准(货号SM1333
  • 泳道C: 对照, 未经酶切的质粒DNA

新品 Thermo Scientific FastDigest限制性内切酶可上传至Vector NTI软件

FastDigest限制性内切酶导入说明
Vector NTI Express or Vector NTI Express Designer
Vector NTI Advance

用于导入的数据文件
 FastDigest 限制性内切酶数据文件