可靠的准确度十分重要

Invitrogen Qubit荧光定量仪及配套试剂具有广泛认可的口碑,已拥有超过3000篇的引用文献及获得上百位客户的积极评价。 因为高灵敏度的DNA检测,高特异性的RNA检测以及其他一系列可用的检测功能,Invitrogen Qubit荧光定量仪成为了广大使用者追求准确性的首选。


客户评价

 

快速,简单且拥有出色的重复性;比分光光度计更可靠,结果更可信。

— Kevin Barr,,西安大略大学

它让我也可以进行浓度极低样品的检测。 优异,快速且简单。

— Sylvia Rodriguez, 生物医学研究所 (巴塞罗那IRB)


Qubit荧光定量仪 vs. Quantus荧光定量仪

Qubit荧光定量仪是一款十分小巧且拥有直观用户使用界面的台式DNA、RNA及蛋白定量分析仪器。 该款仪器可与Invitrogen Qubit检测试剂盒搭配使用以获取相对于紫外吸光值测定方法更为灵敏而准确的结果,非常适用于包括克隆、测序、转染、qPCR以及蛋白检测在内的多种应用。 在这里我们将Qubit系统与P公司的Quantus™荧光定量仪和QuantiFluor™检测试剂盒进行了比较。

DNA检测灵敏度

P公司声称Quantus可比Qubit获得10倍以上的dsDNA检测灵敏度*,而两者在0.5 ng/mL的浓度以下时都会出现不准确性 (图1)。 Qubit荧光定量仪在计算值超20%的CV值时会提示超出检测范围,使得检测结果更为可信。 表1 各种仪器的多维度比较总结。

  Qubit与Quantus平台上QuantFluor检测试剂在低浓度DNA样品检测时的结果比较  

图 1. 检测灵敏度。
InvitrogenQubit dsDNA HS检测试剂盒 与QuantiFluor dsDNA检测试剂盒在0.5 ng/mL的样品浓度时结果相当,但QuantiFluor在0.1 ng/mL时检测结果的可变系数(CV)达到了112%。 Qubit荧光定量仪在CV值超过20%时会提示超出检测范围;而Quantus荧光定量仪则无此功能。

表 1. dsDNA定量数据与其他仪器特点的比较。

  Qubit荧光定量仪及检测试剂 Quantus荧光定量仪及QuantiFluor检测试剂
灵敏度(dsDNA) 0.5 ng/mL (10% CV) 0.1 ng/mL (112% CV)
检测范围† (dsDNA) 0.5 ng/mL到5 µg/mL 0.1 ng/mL到1 µg/mL
检测限 是—在超出检测上限及下限时提供提示信息 否—在任何样品的荧光信号值高于背景值时均会提供浓度值
显示 直观的触摸大屏 按钮式导航
数据存储 1,000个样品 20个样品
数据传输 USB闪存或线缆 不直接的—需要下载软件至计算机上
† 结合了Qubit拓展范围及高灵敏度检测试剂盒的范围

在DNA存在时的RNA定量准确度

Invitrogen Qubit RNA检测试剂盒即便在RNA和DNA 1:1混合时仍然可以为RNA提供准确而特异的检测结果,而Quantus荧光定量仪上的QuantiFluor RNA检测试剂盒在DNA浓度低于3 µg/mL时则无法有效区分RNA和DNA (图2)。 这对于可能含有DNA的微量低浓度样品来说十分重要。

  Qubit与Quantus平台上QuantFluor检测试剂在混有DNA的RNA样品检测时的结果比较  

图 2. 在DNA存在时的RNA检测准确度。
InvitrogenQubit RNA BR (拓展范围)检测试剂盒 在存在DNA的低浓度样品中也可以提供高度特异性的结果。 QuantiFluor检测试剂盒仅能检测含量较高的DNA和RNA。

Qubit荧光定量仪拥有更多的检测试剂盒

Qubit荧光定量仪支持高灵敏度或更宽范围的dsDNA及RNA定量检测 (表2)。 还可提供寡核苷酸、ssDNA、蛋白以及microRNA的定量分析。

表 2. 各种荧光定量仪可用的检测试剂盒。

检测试剂盒‡  Qubit荧光定量仪适配的检测试剂盒 Quantus荧光定量仪适配的QuantiFluor检测试剂盒
dsDNA
RNA 是§ 
microRNA  否 
蛋白质  否 
ssDNA或寡核苷酸
‡包括胆固醇和葡萄糖在内的新款检测试剂盒 可以用于Invitrogen Qubit 2.0、3.0以及4荧光定量仪。  
§Quantus荧光定量仪平台的QuantiFluor RNA检测试剂盒也能检测DNA。 

Qubit荧光定量 vs. 紫外吸光法定量

核酸检测和定量对很多生物学研究至关重要。 一直以来,都是使用分光光度计在260nm处的吸光值来对DNA和RNA进行定量。 尽管这种方法十分常见,但在一些特定应用中会有不准确性[1-4]。

Invitrogen Qubit荧光定量仪和基于紫外吸光法的检测仪器可以联系使用来检测RNA或DNA的浓度—Qubit荧光定量仪用于目标分子的准确定量而基于紫外吸光值的分光光度计可以用于监测污染物的存在。 我们将Qubit荧光定量仪与一款广泛使用的微体积分光光度计进行了比较。 主要的差别已罗列在 表3,并展示在 图3-5和该视频中。

表 3. 定量方法比较。

  Qubit荧光定量仪 基于紫外吸光法的微体积分光光度计
定量方法 利用特异性结合DNA、RNA或蛋白的荧光染料 紫外吸光值测定 (测量在260nm的吸光值以及260nm/280nm的吸光值比例)
DNA或RNA的选择性 (图3) 同一样品中的DNA和RNA均能分别被精确测量 样品的测量结果中既有DNA也有RNA的,无法有效区分——不能区分同一样品中的DNA和RNA
低浓度时的准确性及精准度(图4) 样品浓度低至10 pg/μL依然可以准确进行DNA定量 不推荐用于2 ng/μL浓度以下;<10 ng/μL时样品浓度的变化通常会较高
灵敏度及检测范围(图5) 样品有效的浓度范围在10 pg/μL~1 μg/μL DNA之间 样品检测的浓度范围在2 ng/μL~15 μg/μL之间;使用0.5–2 μL的样品
能否鉴定污染 提供显示污染物存在的峰图


  图 3. Qubit与紫外分光光度法在选择性方面的比较。 根据试剂盒的操作方法,在Qubit 荧光定量仪上分别利用Qubit DNA BRQubit RNA BR检测试剂盒,测量三份重复的λDNA(10 ng/μL)和浓度不等的E. coli rRNA(0–100 ng/μL)样品。 随后,用一种微体积分光光度计对同样的样品进行三重复平行测定,并使用一种基于比色皿的分光光度计进行单次测定。 所标示的DNA和RNA浓度,显示了Qubit分析管中稀释之前初始样品的浓度。 红、黄折线则分别标示了初始样品中DNA和RNA的实际浓度。 实际使用的核酸浓度是通过稀释纯的浓DNA或RNA,直至用比色皿分光光度计在260nm处的吸光值为1.0时而设定的。 储存液的浓度则是根据所用的稀释方法而计算得出的。 根据紫外分析的结果,样品中的DNA和RNA是无差别的—即无法进行区分。
图 4. Qubit荧光定量的准确性及精准度。 与前相同的十份重复λDNA(0.01~10 ng/μL)样品,根据试剂盒标准操作流程使用Quant-iT DNA HS检测试剂盒在Qubit荧光定量仪上进行检测。 同样的10份重复样品在基于紫外吸光值的分光光度计上进行测量,并对结果的准确性(A)和精准性(B)进行比较。 通过对于已知浓度的平均偏差作为准确性的评判标准。 所标示的DNA浓度,是在Qubit®分析管中稀释之前初始样品的浓度。
  图 5. 在Qubit荧光定量仪上使用Qubit检测试剂盒,与基于紫外吸光值的分光光度计所能测定的样品浓度范围比较。

参考文献

  1. Glasel JA (1995) Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios. Biotechniques 18:62-63.
  2. Huberman JA (1995) Importance of measuring nucleic acid absorbance at 240 nm as well as at 260 and 280 nm. Biotechniques 18:636.
  3. Manchester KL (1995) Value of A260/A280 ratios for measurement of purity of nucleic acids. Biotechniques 19:208–210.
  4. Manchester KL (1996) Use of UV methods for measurement of protein and nucleic acid concentrations.Biotechniques 20:968–970.

资源