701683 ABfinity recombinant rabbit monoclonal antibody

Invitrogen™兔重组抗体源自可生成兔单克隆抗体的细胞系,并通过分离及克隆特定抗体的重链和轻链DNA序列而产生。这些重组的克隆抗体并不会因细胞系的改变或批次间的改变而受影响,因此可实现极高的特异性和效价。

我们的Invitrogen™ ABfinity™重组兔抗均为寡克隆抗体(克隆文库作为最终的产品)或单克隆抗体(从克隆文库中分离的单一克隆作为最终的产品)。

ABfinity兔重组单克隆抗体具有:

  • 相对于普通抗体更好的特异性和灵敏度
  • 重组技术带来的批次间一致性
  • 无动物来源成分,细胞培养的产物

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如何查找用于特定目标蛋白的ABfinity抗体:

  • 第1步:使用下列的搜索工具查找到目标蛋白。
  • 第2步:选择“兔”作为宿主进行筛选(于侧边栏)。
  • 第3步:过滤出“单克隆”或“寡克隆”的结果(于侧边栏)。

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专题视频

什么是ABfinity技术?

ABfinity重组抗体是采用专有技术生产的高特异性和高质量的单克隆抗体,可产生无与伦比的一致性结果。

ABfinity抗体是通过免疫动物、功能筛选并将免疫原特异性抗体基因克隆到高水平表达载体中而得到的重组抗体。通过在哺乳细胞中表达并利用蛋白质A纯化,实现了抗体的大规模生产。这些重组抗体是在哺乳表达系统中表达的,但与从血清中分离的或由杂交瘤产生的对等物相似。完整的IgG在非还原型凝胶上出现在约150 kDa的条带处,在还原型凝胶上可产生一条约25 kDa的轻链条带和一条约50 kDa的重链条带。

图1: 重组兔单克隆抗体生产

ABfinity抗体是通过将重链和轻链抗体cDNA转染至哺乳细胞而进行生产的。这种高度可重复的生产过程产生了前所未有的批次间稳定性。这种稳定性可节约时间和金钱,因为实验条件无需再验证。图1为利用独立批次的ABfinity抗体产生的一致性免疫印迹分析结果及其图示。图2为该抗体在免疫细胞化学中表现出的批次间稳定性及其图示。图3为该抗体在流式细胞术中产生的相同结果。

 


图 1:免疫印迹中的批次间稳定性。通过还原性凝胶对HeLa细胞提取物进行分离,并用四支不同批次的SMAD2 ABfinity抗体进行检测。泳道A、B和C中的浓度分别为2 μg/mL、1 μg/mL和0.5 μg/ mL。利用WesternBreeze化学发光试剂盒(抗兔)检测一抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果,表现出极佳的批次间稳定性(n=4,误差线=标准误)。

 


图 2:抗体在免疫细胞化学中的批次间稳定性。利用4个不同批次的SMAD2 ABfinity抗体对组织培养的HeLa细胞进行染色。A-D代表批次1-4浓度为3 µg/mL,E-H代表批次1-4浓度为0.5 μg/mL。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果,表现出极佳的批次间稳定性(n=4,误差线=标准误)。


 
图3
流式细胞术中的批次间稳定性。利用4个不同批次的SMAD2 ABfinity抗体以不同浓度进行流式细胞术定量分析,结果表明抗体具有高度的批次间稳定性。利用FIX PERM 试剂将HeLa细胞固定和透性化。孵育SMAD2 ABfinity抗体,随后利用Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG 进行检测(n=4,误差线=标准误)。

可靠的灵敏性和特异性

ABfinity平台生产的抗体比其他所有抗体开发平台具有更高的灵敏性和特异性。这些抗体只与目标蛋白反应,可消除非特异性结合产生的错误信号。更高灵敏度的抗体能够检测到其他抗体难以检测的低水平靶标。此外,检测所需抗体更少,可节约珍贵样品。

图4利用免疫印迹分析直接对比了ABfinity STAT4抗体和最佳的市售STAT4抗体。包括来自多克隆、传统杂交瘤单克隆和兔杂交瘤单克隆平台的抗体。图5表明ABfinity抗体在免疫细胞化学中产生了相同结果。流式细胞术(结果未显示)结果相近,表明ABfinity抗体具有高灵敏性和特异性。

immunocytochemistry-fig5

图5:使用ABfinity抗体可获得更好的免疫细胞化学结果。使用2.5 μg/mL的STAT4 ABfinity抗体与图4中相同的抗体获取的免疫细胞化学结果比较。来自其他供应商的STAT4 抗体以其推荐浓度使用。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗。

抗体验证

利用多种应用对ABfinity抗体进行验证和表征。这种广泛的验证过程可产生值得信赖的靶标特异性,无需任何优化。图6
至9举例说明了这些应用。

 

图6:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的Jurkat细胞进行流式细胞术分析。
使用50 µM PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(红线)孵育Jurkat细胞1小时,绿线为空白对照组,并使用FIX PERM试剂 将细胞固定和透性化。随后,细胞用1μg/检测的ABfinity™重组兔单克隆抗体进行染色。之后再使用Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG。蓝线表示二抗对照组。

      



图 7:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的小鼠成纤维细胞进行免疫细胞化学分析。 使用10 µg/mL胰岛素(A)处理小鼠成纤维细胞,(B)为空白对照组,并利用兔anti-AKT [pS473] (5 µg/mL)标记细胞。以磷酸肽作为抗体免疫原进行孵育的细胞所产生的信号降低(C),而使用非磷酸肽的未降低(D)。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗,使用Hoechst(蓝色)对细胞核进行染色。

 

   



图 8:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的人食管癌组织进行免疫组织化学分析。利用anti-AKT [pS473] (0.5 µg/mL)对甲醛固定,石蜡包埋(FFPE)的人食管癌组织进行标记。使用EDTA预处理组织,并使用SuperPicTure Polymer DAB进行检测。图片为20倍放大。请注意,细胞核和细胞质是在肿瘤细胞内染色。

 



图 9: 对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体
的3T3细胞裂解液进行免疫印迹分析。利用anti-AKT [pS473] (0.1 µg/mL)对未处理的3T3裂解物(泳道1)或经PDGF处理的3T3裂解物(泳道2)中的AKT [pS473]进行标记。

什么是ABfinity技术?

ABfinity重组抗体是采用专有技术生产的高特异性和高质量的单克隆抗体,可产生无与伦比的一致性结果。

ABfinity抗体是通过免疫动物、功能筛选并将免疫原特异性抗体基因克隆到高水平表达载体中而得到的重组抗体。通过在哺乳细胞中表达并利用蛋白质A纯化,实现了抗体的大规模生产。这些重组抗体是在哺乳表达系统中表达的,但与从血清中分离的或由杂交瘤产生的对等物相似。完整的IgG在非还原型凝胶上出现在约150 kDa的条带处,在还原型凝胶上可产生一条约25 kDa的轻链条带和一条约50 kDa的重链条带。

图1: 重组兔单克隆抗体生产

ABfinity抗体是通过将重链和轻链抗体cDNA转染至哺乳细胞而进行生产的。这种高度可重复的生产过程产生了前所未有的批次间稳定性。这种稳定性可节约时间和金钱,因为实验条件无需再验证。图1为利用独立批次的ABfinity抗体产生的一致性免疫印迹分析结果及其图示。图2为该抗体在免疫细胞化学中表现出的批次间稳定性及其图示。图3为该抗体在流式细胞术中产生的相同结果。

 


图 1:免疫印迹中的批次间稳定性。通过还原性凝胶对HeLa细胞提取物进行分离,并用四支不同批次的SMAD2 ABfinity抗体进行检测。泳道A、B和C中的浓度分别为2 μg/mL、1 μg/mL和0.5 μg/ mL。利用WesternBreeze化学发光试剂盒(抗兔)检测一抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果,表现出极佳的批次间稳定性(n=4,误差线=标准误)。

 


图 2:抗体在免疫细胞化学中的批次间稳定性。利用4个不同批次的SMAD2 ABfinity抗体对组织培养的HeLa细胞进行染色。A-D代表批次1-4浓度为3 µg/mL,E-H代表批次1-4浓度为0.5 μg/mL。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗。左图为4个批次抗体在不同浓度下的定量结果,表现出极佳的批次间稳定性(n=4,误差线=标准误)。


 
图3
流式细胞术中的批次间稳定性。利用4个不同批次的SMAD2 ABfinity抗体以不同浓度进行流式细胞术定量分析,结果表明抗体具有高度的批次间稳定性。利用FIX PERM 试剂将HeLa细胞固定和透性化。孵育SMAD2 ABfinity抗体,随后利用Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG 进行检测(n=4,误差线=标准误)。

可靠的灵敏性和特异性

ABfinity平台生产的抗体比其他所有抗体开发平台具有更高的灵敏性和特异性。这些抗体只与目标蛋白反应,可消除非特异性结合产生的错误信号。更高灵敏度的抗体能够检测到其他抗体难以检测的低水平靶标。此外,检测所需抗体更少,可节约珍贵样品。

图4利用免疫印迹分析直接对比了ABfinity STAT4抗体和最佳的市售STAT4抗体。包括来自多克隆、传统杂交瘤单克隆和兔杂交瘤单克隆平台的抗体。图5表明ABfinity抗体在免疫细胞化学中产生了相同结果。流式细胞术(结果未显示)结果相近,表明ABfinity抗体具有高灵敏性和特异性。

immunocytochemistry-fig5

图5:使用ABfinity抗体可获得更好的免疫细胞化学结果。使用2.5 μg/mL的STAT4 ABfinity抗体与图4中相同的抗体获取的免疫细胞化学结果比较。来自其他供应商的STAT4 抗体以其推荐浓度使用。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗。

抗体验证

利用多种应用对ABfinity抗体进行验证和表征。这种广泛的验证过程可产生值得信赖的靶标特异性,无需任何优化。图6
至9举例说明了这些应用。

 

图6:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的Jurkat细胞进行流式细胞术分析。
使用50 µM PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(红线)孵育Jurkat细胞1小时,绿线为空白对照组,并使用FIX PERM试剂 将细胞固定和透性化。随后,细胞用1μg/检测的ABfinity™重组兔单克隆抗体进行染色。之后再使用Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG。蓝线表示二抗对照组。

      



图 7:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的小鼠成纤维细胞进行免疫细胞化学分析。 使用10 µg/mL胰岛素(A)处理小鼠成纤维细胞,(B)为空白对照组,并利用兔anti-AKT [pS473] (5 µg/mL)标记细胞。以磷酸肽作为抗体免疫原进行孵育的细胞所产生的信号降低(C),而使用非磷酸肽的未降低(D)。使用1:1000稀释的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG作为二抗,使用Hoechst(蓝色)对细胞核进行染色。

 

   



图 8:对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体的人食管癌组织进行免疫组织化学分析。利用anti-AKT [pS473] (0.5 µg/mL)对甲醛固定,石蜡包埋(FFPE)的人食管癌组织进行标记。使用EDTA预处理组织,并使用SuperPicTure Polymer DAB进行检测。图片为20倍放大。请注意,细胞核和细胞质是在肿瘤细胞内染色。

 



图 9: 对标记了AKT [pS473] - ABfinity 重组兔单克隆抗体
的3T3细胞裂解液进行免疫印迹分析。利用anti-AKT [pS473] (0.1 µg/mL)对未处理的3T3裂解物(泳道1)或经PDGF处理的3T3裂解物(泳道2)中的AKT [pS473]进行标记。