我们提供2500多种磷酸化位点特异性抗体,用于分析正常和疾病状态中的关键靶点,包括心血管疾病、癌症、炎症、神经退行性疾病和糖尿病。这些新型工具为复杂信号转导事件的研究提供了重要思路,包括揭示药物干预疾病的复杂性。

  • 可信度高—大量验证确保了抗体的高度特异性
  • 性能出色—经过验证的稳定抗体,适用于多种应用
  • 选择丰富—大量独有的特异性抗体可选

By combining strong in-house knowledge of chemistry, immunology, and signal transduction with dedicated R&D and production, Life Technologies is your first choice for cell biology research.  We offer more than 300 Novex® phosphorylation site–specific antibodies (phosphospecific antibodies) and is actively expanding this product line to enable analysis of key targets in normal and disease states, including cardiovascular disease, cancer, inflammation, neurodegenerative diseases, and diabetes. These new tools are providing critical insight into the investigation of complex signal transduction events, including unraveling the intricacies of drug intervention in disease.

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  • 性能出色—经过验证的稳定抗体,适用于多种应用
  • 选择丰富—大量独有的特异性抗体可选

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  • 可信度高—大量验证确保了抗体的高度特异性
  • 性能出色—经过验证的稳定抗体,适用于多种应用
  • 选择丰富—大量独有的特异性抗体可选

已确定您感兴趣的信号通路蛋白靶点?

使用在线检索工具查找目标抗体。然后通过靶标或宿主种类、单克隆或多克隆抗体类型、特定磷酸化状态和其他条件进行筛选。

Primary Antibodies reference component

精选视频

常见磷酸化特异性抗体靶标包括

选择磷酸化特异性抗体的考虑因素

磷酸化特异性抗体是经过亲和纯化的兔多克隆单克隆抗体,对于在特定酪氨酸、苏氨酸或丝氨酸残基上发生磷酸化的目标蛋白具有单一特异性(图1)。

图1 - 蛋白质磷酸化检测。检测胰岛素处理的3T3L1脂肪细胞中的双磷酸化ERK1/2。J Biol Chem (1998) 273:31408. Courtesy of Dr. Jacqueline Stephens, Louisiana State University.

我们磷酸化抗体的特点:

  • 使单个磷酸化位点的状态易于确定,从而指示蛋白质的活性状态(图1)
  • 可用于多种免疫检测应用,包括免疫组织化学、定量ELISA和流式细胞分析 (图2)
  • 在通过免疫染色检测磷酸化蛋白时实现其亚细胞定位

IHC analysis of ERK1/2

图2A. 使用ERK1/2 [pTpY185/187]磷酸化特异性抗体对正常(插图)或心肌病小鼠心脏切片中的磷酸化ERK1/2进行免疫组化分析。

ERK1/2 in Jurkat cells

图2B. 使用ERK1/2 [pTpY185/187] 磷酸化特异性抗体对Jurkat细胞中的磷酸化ERK1/2进行定量ELISA分析。

图2C. 使用ERK1/2 [pTpY185/187]磷酸化特异性抗体对PMA处理的Jurkat细胞中的磷酸化ERK1/2进行流式细胞分析。细胞提取物由北卡罗莱纳大学Michael Schaller博士友情提供。

我们使用一系列的专利性制备方法,包括:

  • 抗原设计和递呈
  • 多种免疫策略
  • 利用阳性和阴性吸附进行充分的亲和纯化
  • 优化预期反应性的方法学(图3)


通过这些方式,即可获得能够产生清晰信号、且对目标蛋白具有高度特异性的磷酸化特异性抗体。

Phosphospecific Purification Process

图3. 纯化过程。泳道1:通用anti-pY抗体;泳道2:经过阳性[pYpY1330/1337] 肽纯化后的anti–Ron [pYpY1330/1337]抗体;泳道3:经过阳性[pYpY1330/1337] 肽和阴性通用pY肽纯化后的anti–Ron [pYpY1330/1337]抗体。数据证实了结合阴性和阳性亲和纯化方法的有效性。

为了确保得到对目标磷酸化序列具有单一特异性的多克隆抗血清,我们开展了多种工作。每张抗体数据表中都包含QC数据。

  • 在多种细胞系中进行蛋白免疫印迹分析
  • 肽/磷酸肽竞争实验(图4)
  • 定点突变分析(Ser/Thr→Ala或Tyr→Phe)(图5)

FAK specificity

图4. 特异性。FAK [pY397]磷酸化特异性抗体对CEF细胞分析的结果表明,只有FAK [pY397]对应的磷酸肽能够阻断免疫印迹信号。细胞提取物由北卡罗莱纳大学Michael Schaller博士友情提供。

FAK phosphospecific


图5A. 理想的信噪比。FAK [pY397]磷酸化特异性抗体的分析表明,FAK (Tyr→Phe F397)突变后免疫印迹信号缺失。



 

 

Signal to Noise

Figure 5B. 理想的信噪比。FAK [pY397] 磷酸化特异性抗体的分析表明,FAK (Tyr→Phe F397) 突变后免疫印迹信号缺失。

我们拥有严格的常规生产流程,包括:

  • 在所有测试中使用标准化的磷酸化特异性抗体生产流程以及适当的控制措施,作为我们质量保证计划的一个组成部分
  • 在多种细胞系和种属中进行验证,包括内部和beta现场测试
  • 证实批次间一致性
  • 将2个或多个经预审核的单独物料混合,生成各个批次的抗体,从而使批次间差异最小化

我们的制备方法大大提高了生成高品质抗体的概率:

  • 对靶标的高度(单一)特异性
  • 优秀的批次间一致性
  • 高亲和识别性
  • 高反应性
  • 卓越的信噪比
  • 适用于多种免疫检测应用的能力

基于严格的质量控制标准和专利性的生产方法,我们制备的抗体较其他品牌具有更卓越的灵敏度。我们的抗体具有高反应性,能够检测到细胞提取物中的内源性蛋白质水平(图6)

图6. 磷酸化特异性抗体。使用p38抗体将未处理的PC12细胞与经山梨醇处理的细胞进行比较。根据各产品附带的说明书进行免疫印迹分析。


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