scientist applying a coverslip to a sample on a glass slide using forceps

Using a mounting medium can improve your image

Researchers typically use a mounting medium to maintain their samples good condition, either for a short period or for long-term storage and preservation.

Learn about the basic types of mounting media and what to consider when choosing one so that you gain the level of protection and preservation you’re looking for.

Photograph of scientist applying a coverslip to a sample on a glass slide using forceps  

使用封片剂可提升成像效果

研究人员通常会使用封片剂来维持良好的样品状态,短期储存或长期保存样品。

您可以通过本节内容了解基本的封片剂类型以及在选择封片剂时应该考虑的问题,以确保达到您所期望的样品保护和保存效果。

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Topics in this lesson

本节主题


封固剂是什么?

封片剂是当样品在显微镜下成像时所处的介质,最简单的封片剂类型是空气,或者各种盐缓冲溶液,如PBS。多数人在提到封片剂时,指的是通过 免疫荧光标记进行 固定细胞成像 时使用的载体介质;而在活细胞成像时,人们更常使用成像剂来表示成像时样品所处的介质。

在成像时,需将固定细胞样品放入封片剂中的理由有如下几条:

  • 有助于在成像时使样本固定在一处位置
  • 可防止样品干燥
  • 有助于更适合您所用的物镜的 折射率
  • 有助于防止 光淬灭
  • 有助于较长时间内保存样品

封片剂的选择很大程度上依赖样品类型、成像方式以及所使用的荧光染料或 荧光蛋白 。目前有很多种封片剂可供选择(无论您是购买商业出售的,还是希望自行“配制”),这些封片剂的成分可能存在很大的差异,有些基于有机溶剂,如苯或甲苯;而有些则为水溶性或含水封片剂。


固定细胞成像的封片剂

目前共有两种主要的封片剂类型:水溶性或可溶性型。这二者的工作流程主要差异在于,采用水溶性封片剂时,样品可以直接从缓冲液转移到封片剂中;而在使用可溶性封片剂时,在将样品转移到封片剂中之前,通常需要进行脱水步骤(通过溶剂或空气)处理。此类可溶性封片剂保存样品的时间最长。

最常见的水溶性封片剂类型是简单的缓冲盐溶液,如PBS。缓冲盐溶液成像可使您在进行抗体标记和染色之后,通过最少的后期处理步骤即可快速对样品成像,同时也允许您快速检查自己的样品,以确定染色效果是否符合预期。如果您需采用多色荧光标记样品且需要在每一步骤检查染色程度,或者如果不能确定实验方案是否有效、希望立刻得到答案时,这一类封片剂很适合。


有助于保护和保存样品的封片剂类型

封片剂配方可额外带来很多好处,例如优化 折射率 以匹配玻璃器皿、防止 光淬灭, 或长期储存保留样品。请牢记一点,有些配方需要“固化”或硬化的时间。对于需要固化的封片剂,在成像之前务必等待样品完全固化,以确保在玻片上移动它时不会无意间损坏或破坏样品,也不会导致已经染色的细胞出现光淬灭。通常,在完全固化之前,封片剂的折射率都难以达到某个特定的值,其光保护性也会随着固化过程逐渐增加。封片剂完全固化之后的坚硬程度也存在差异;有些看起来像是果冻,有些则会像硬塑料。


液封样品有助于防止干燥

在使用PBS或其他液态封片剂时,您可能认为自己需要密封盖玻片的边缘以防止样品干燥或更长时间的保存。沿着盖玻片的边缘涂上诸如熔解石蜡或指甲油等常用密封剂,以便形成潮湿的屏障,同时有助于将盖玻片粘附在玻片上。如果您选择密封盖玻片,务必要注意某些密封剂自身会发出荧光,同时还要避免对任何靠近密封剂的区域成像,以确保不必为额外的背景荧光问题而烦恼。

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