Premo™ FUCCI细胞周期传感器  

快来体验Premo™ FUCCI细胞周期传感器

荧光泛素化细胞周期指示剂 (FUCCI) 由Miyawaki及其同事开发1,是一款经过遗传编码的双色 (红色和绿色) 指示剂,可帮助您跟踪细胞群体内的细胞分裂情况。 我们将FUCCI基因构筑质体结合到功能强大的BacMam基因输送系统中,从而可简便、高效地标记细胞并追踪细胞分裂。

  • 在群体水平上实时检测细胞周期阶段
  • 借助BacMam基因输送系统,可轻松、高效地完成标记工作

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上图——使用Premo™ FUCCI细胞周期传感器转染U2OS细胞,使细胞分裂。 采集15小时的细胞图像。
通过对细胞群内每个细胞的细胞周期阶段进行直接读数,监测细胞增殖改变。
BacMam在培养细胞、原代细胞和干细胞等多种细胞内的高效转染。
独立控制每种颜色组分的表达水平,优化颜色平衡

Premo™ FUCCI细胞周期传感器的工作原理

Premo™ FUCCI细胞周期传感器是一种基于荧光蛋白的系统,它使用了与不同细胞周期调控因子融合的红色 (RFP) 和绿色 (GFP) 荧光蛋白: cdt1和geminin。

在细胞周期过程中,上述两种蛋白被特定的E3泛素连接酶泛素化,经由蛋白酶体降解。 E3连接酶可对上述两种蛋白的活性进行时序调控,从而在细胞周期过程中实现geminin和cdt1水平的双相周期变化。 在细胞周期的G1期,geminin被降解;因此只有RFP标记的cdt1在细胞核内呈现红色荧光。 在S、G2和M期,cdt1被降解,只有GFP标记的geminin保留,从而使细胞核呈蓝色荧光。

在G1/S转换过程中,当cdt1水平下降且geminin水平增高时,这两种蛋白均存在于细胞内,当绿色和红色图像覆盖时,细胞核发出黄色荧光。 这种从红色-黄色-到绿色的动态颜色变化代表了细胞周期和分裂的进程 (图1和2)。
 
图1——Premo™ FUCCI细胞周期传感器

Figure 1Two-color cell cycle mapping using Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor.

 

Premo™ FUCCI细胞周期

Figure 2—Imaging cell cycle progression in live cells with Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor. 使用Premo™ FUCCI细胞周期传感器转染U2OS细胞,使细胞分裂。 采集15小时的细胞图像。
1. Sakaue-Sawano et al. (2008) 细胞 132:487–498.