细胞表面受体与其特异性抗体结合时,可诱导发生受体介导的内吞作用。它们通常被作为靶向传递治疗用药物、毒素、酶或DNA的载体进行研究。

我们可提供多种抗体标记染料,用于基于洗涤或淬灭的检测,对抗体内化进行检测。

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pHrodo iFL技术用于检测抗体内化

一些荧光强度不受环境影响的荧光基团(如Invitrogen Alexa Fluor染料),研究内化时需要使用淬灭剂。而pHrodo iFL 染料在中性pH条件下是不发出荧光,内化后在酸性pH环境下可自动发出明亮的荧光,且无需使用淬灭剂(如图)。

pHrodo iFL染料在中性pH值时几乎不发荧光,随着染料被内化且pH降低,Red(红色)或Green (绿色)荧光信号会逐渐增强。而荧光信号的增强则可用于检测胞吞途径的过程。

pH response profi les of trastuzumab conjugates prepared with amine-reactive Invitrogen pHrodo iFL Red and pHrodo iFLGreen reagents
pH response profiles of trastuzumab conjugates prepared with amine-reactive Invitrogen pHrodo iFL Red and pHrodo iFLGreen reagents. These conjugates will be minimally fluorescent at a neutral pH outside of cells, but they will become brightly fluorescent upon internalization into cells.

pHrodo iFL抗体标记方法

pHrodo iFL Green和pHrodo iFL Red活性染料是在pHrodo染料(用于吞噬、内吞、和内化过程的指示剂)基础上进行升级改进而来的。pHrodo iFL染料的溶解性进行了优化,提高了与标记抗体的结合,避免可能会在结合过程中发生沉淀。荧光染料可采用三种不同的抗体标记技术进行了标记结合,以满足您检测抗体内化的需要。

位点特异性的SiteClick抗体标记技术

SiteClick抗体标记系统可以简单且位点特异地将化合物(包括荧光染料或毒素等)连接至几乎所有IgG抗体只有在重链才存在的N端多糖位置,远离抗原结合结构域,实现每一次标记之间和不同抗体之间(无论哪种构型和宿主种属)的出色可重复性。抗体可以通过在糖残基上插入叠氮基团进行酶修饰,而使其可以发生点击化学反应,然后与一系列Click-iT sDIBO Alkynes(可标有Alexa Fluor染料、生物素或其他所需连接分子的活性形式)通过Click化学反应进行标记物连接。

High-content analysis of HER2-positive cells incubated with SiteClicked  pHrodo iFL Red–labeled Trastuzumab (false colored green) and Hoescht 33342 counter stain
High-content analysis of HER2-positive cells incubated with SiteClicked pHrodo iFL Red–labeled Trastuzumab (false colored green) and Hoescht 33342 counter stain.

Zenon抗体标记方法可用于快速筛选

Zenon抗体标记产品提供了一种非常快速(约十分钟内)标记IgG抗体的方法,从而成为抗体内化筛选的一种非常高效有用的工具。Zenon标记方法采用了与pH敏感的pHrodo iFL染料或经典的Alexa Fluor染料偶联结合的Fab片段。这些Fab片段可直接结合至IgG抗体的Fc区,且不影响目标抗体的抗原识别位点,同时也具有很好可靠的标记恒定度。Zenon技术可标记低至1 μg 的抗体,与传统的使用氨基或巯基反应性标记方法不同,Zenon抗体标记可兼容BSA以及其他的稳定蛋白。

The Zenon pHrodo iFL labeling reagents
The Zenon pHrodo iFL labeling reagents can be complexed with human or mouse IgG to provide rapid labeling for fast, scalable screening of antibody internalization for many antibody samples.

pHrodo iFL红色及绿色氨基反应性染料及标记试剂盒

pHrodo iFL染料可通过抗体上的赖氨酸用于传统的抗体标记。这些氨基反应性的pHrodo iFL STP酯具有绿色和红色两种版本,可作为单独包装或微量蛋白标记试剂盒提供,后者包含标记及纯化蛋白或抗体所需的全部试剂。


讲座视频:Simple and effective tools for ADC screening and characterization


用于抗体内化研究的抗体标记

产品名称 标记规格 SKU
Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25609
Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25610
Zenon pHrodo iFL Red  Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates   Z25611
Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25612
产品名称 标记规格 SKU
Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25609
Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25610
Zenon pHrodo iFL Red  Mouse IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates   Z25611
Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Kit Up to four  96 well plates Z25612

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