用于固定细胞的ProLong®抗淬灭封片剂可以抑制发生光漂白,保护荧光标记靶标分子的信号,以便进行样本长期储存和分析。该试剂会在12–48小时内(取决于样品厚度)固化,并形成折射率为1.47–1.52的半硬质凝胶。而固化封片后的样品,在适当储存条件下可以保存数月。

用于固定细胞的ProLong 抗淬灭封片具有以下几大优点:

  • 可抑制光谱范围内的光漂白,即使在经过长期保存后
  • 在光谱范围内呈现低背景
  • 硬质封片剂
  • 可以选择带含或不含DAPI配方
  • 即用型实验室存放优化配方
  • 可根据您的需要选择折射率:ProLong Glass 试剂的折射率为1.52,ProLong Diamond和ProLong Gold试剂的折射为1.47
ProLong 抗淬灭试剂  

ProLong抗淬灭封片剂可以抑制发生光漂白,保护荧光标记靶标分子的信号,以便进行样本长期储存和分析。该试剂会在24小时内固化,形成折射率为1.46的半硬质凝胶。而固化封片后的样品,在适当储存条件下可以保存数月。ProLong抗淬灭试剂具有以下几大优点:

  • 可抑制光谱范围内的光漂白,即使在经过长期保存后
  • 硬质封片剂
  • 具有含DAPI和不含DAPI两款形式
  • 即用型实验室存放时优化配方
  • 过夜固化后的折射率为1.42,数日后增加至1.46

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选择与您的实验相匹配的抗淬灭试剂

用于固定细胞成像实验的ProLong抗淬灭试剂的优势亮点

ProLong Gold 抗淬灭封片剂的特点

ProLong Gold 抗淬灭封片剂因能够保护整个可见光谱内的信号,使初始信号几乎无淬灭,备受广大实验员认可,如今已被广泛用于Invitrogen高性能荧光染料和染色剂。ProLong Gold抗淬灭试剂能够在室温环境下保持稳定—即可存放在实验台上,方便在下一次成像实验中随时取用。

ProLong Diamond 抗淬灭封片剂的特点

ProLong Diamond抗淬灭封片剂具有ProLong Gold 试剂对Alexa Fluor 染料所具备的全部性能,此外还可为传统染料和荧光蛋白提供保护。ProLong Diamond是一款性能出色的抗淬灭封片剂,不仅具有低背景,而且能够在可见和近红外光谱内提供抗淬灭保护。存放时,为保持最佳性能,请注意冷藏储存。

ProLong Glass 抗淬灭封片剂的特点

ProLong Glass抗淬灭封片剂具有ProLong Diamond封片剂所具备的全部性能,其清晰度在ProLong系列产品中亦是最佳—具有更高的分辨率和更大的聚焦深度,使图像更明亮、更清晰。ProLong Glass是一款性能杰出的抗淬灭试剂,具有出色的清晰度、与玻璃相同的折射率1.52、最佳焦深和低背景,并且能够在可见和近红外光谱内提供抗淬灭保护。存放时,为保持最佳性能,请注意冷藏储存。

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此组60秒延时拍摄图像结果表明,ProLong系列抗淬灭封片剂可显著增强荧光信号的耐光漂白性。使用荧光素标记的鬼笔环肽标记固定的HeLa细胞,并分别使用ProLong Glass试剂、ProLong Diamond试剂、ProLong Gold试剂、或50% PBS/甘油封片处理。

FITC光漂白曲线,由宽场或共聚焦显微镜照射后样品拍照获得。用mouse anti-tubulin一抗标记HeLa细胞,使用荧光素(FITC)标记的山羊抗小鼠二抗检测,并使用PBS + 50%甘油或多种市售抗淬灭封片剂处理。(A)采用100瓦特汞弧灯照射样品2分钟,用20x 物镜观察,并使用12bit单色相机采集图像,绘制光漂白曲线。图为根据三个视野的平均荧光强度随时间变化的曲线图。(B)使用共聚焦显微镜的20x油镜观察,扫描目标区域50次,每个像素停留时间为1.6 μs,绘制光漂白曲线。激发光源强度设置,参照使ProLong Diamond在最后一次扫描结束时保留50%的初始信号强度标准。检测器增益对所有封片剂保持不变。图为根据各封片样品的15个目标区域的平均荧光强度随扫描次数变化的曲线图。

ProLong 抗淬灭封片剂图像集展示

为固定细胞成像实验选择合适的ProLong 抗淬灭试剂

 
ProLong Gold 抗淬灭封片剂
ProLong Diamond 抗淬灭封片剂 ProLong Glass 抗淬灭封片剂
Alexa Fluor 系列染料
传统染料和荧光蛋白
折射率(固化后)
1.47
1.47
1.52
储存温度 室温 2–8°C 2–8°C
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在全光谱范围内增强荧光信号保护作用

ProLong Glass和ProLong Diamond试剂都是出色的抗淬灭封片剂,不仅具有低背景,在可见和近红外光谱内都能提供抗淬灭保护,同时还可使荧光信号产生更少的初始淬灭。此外,也可为FITC等传统染料和GFP等荧光蛋白提供抗淬灭保护作用。与市售硬质抗淬灭封片剂进行标准化实验对比后,发现ProLong系列抗淬灭封片剂在保护荧光信号和在光谱范围内防止光漂白效应方面的性能均完胜其他同类产品。

荧光染料
Ex/Em (nm)
耐光漂白性*
ProLong Glass ProLong Diamond ProLong Gold VECTASHIELD
DAPI
345/455
+++
+++
++
++
Hoechst 350/461 +++ +++ +++ +++
GFP
488/510
++
++
不推荐
+
BODIPY FL
505/513
未检测
+++
+
+
荧光素
494/518
+++
+++
+
++
Alexa Fluor 488
495/519
+++
++
++
++
Alexa Fluor Plus 488 495/519 +++ ++ + +
Alexa Fluor 555
555/565
+++
+++
+++
+++
Alexa Fluor Plus 555 555/565 +++ +++ ++ ++
Cy3
550/570
++
++
++
++
Alexa Fluor 546
556/575
++ ++
+++
++
四甲基罗丹明
555/580
++
+++
+
+
TagRFP 555/584 未检测 + 不推荐 +
Alexa Fluor 568
578/603
+++
+++
+
+
mCherry 575/610 +++ +++ +++ +++
Texas Red
595/615
+++
+++
+++
++
Alexa Fluor 594
590/617
+++
+++
+++
++
TO-PRO-3
642/661
+++
+++
+
+
Alexa Fluor 647
652/668
+++
+++
+++
不推荐
Alexa Fluor Plus 647 652/668 +++ +++ +++ 不推荐
Cy5
650/670
+++
+++
+++
++
注释:+++ = 80%以上;++ = 65—80%, + = 50—65%, 不推荐 = 50%以下。百分比代表剩余可检测到的信号强度。
* 耐光漂白性通过使用Zeiss™ LSM 710共聚焦显微镜检测剩余信号强度,对光漂白抗性进行定量。首先使用标准免疫细胞化学(ICC)实验方案对HeLa或U2OS细胞进行染色和封片。然后对3个视野内的5个区域扫描15次—每个像素的停留时间为1.58 μs。并针对荧光基团对激发波长和强度进行优化。最后在落射荧光显微镜上用100瓦特汞弧灯照射,光/光子暴露时间将为60—90秒。
VECTASHIELD为Vector Laboratories, Inc. , Burlingame, CA商标。Cy为GE Healthcare UK, Ltd.商标。

获得最清晰、最明亮的图像

ProLong Glass 抗淬灭封片剂具有类似于盖玻片、香柏油和油镜光学器件的折射率(RI)—约1.52的特点与优势,为ProLong试剂产品再添新彩。其出色的光学清晰度意味着,与折射率为1.47的封片剂相比,ProLong Glass 试剂的纵向分辨率提高了75%,可成像聚焦深度提高了3—4倍,可为单层细胞、组织切片或厚度达150 μm的3D细胞培养物等提供清晰的成像。

ProLong Glass抗淬灭封片剂的成像厚度提高40%,使组织切片中厚70 μm的细胞核也能清晰成像。首先处理FFPE猪脑切片并使用DAPI细胞核染色剂染色过夜。然后使用不同市售硬质抗淬灭剂,根据各封片剂的推荐实验方案处理染色样品。并使用Zeiss™ LSM 710共聚焦显微镜的Plan-Apochromat 63x/1.4 NA油镜对组织切片进行观察成像—x和y维度的取样间隔距离为83 nm,z维度的取样间隔距离为100nm,像素尺寸为0.07 μm。最后使用Zeiss™ Zen软件生成Z演算。

ProLong Glass 抗淬灭封片剂固化至最终RI约等于1.52。取300 µL各种封片剂涂布并覆盖待测棱镜表面,并使用Thermo Scientific ABBE-3L 折射计检测不同ProLong抗淬灭封片剂的折射率。

RI为1.52的ProLong Glass比RI为1.47的封片剂具有更高的纵向分辨率。两种封片剂中170 μm微球的横向和纵向分辨率,绘制为在各个焦深处获得的图像点扩散函数(PSF)。(误差线:标准偏差 n ≥ 3)。

使用ProLong Glass 抗淬灭封片剂封固的A549 球状体的纵向和横向共聚焦图像。

Thermo Fisher Scientific产品更绿色环保

为增加便利性并减少冷藏需求对环境的影响,我们的抗淬灭试剂采用滴瓶包装,可以直接存放在实验台上。此外,这些试剂的配方减少了叠氮化钠的用量,有助于降低危害环境和健康的风险。

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