操作简单,适合大量样品分析

Attune® NxT 自动加样器为Attune® NxT 声波聚焦流式细胞仪的可选配置,使大量样品流式分析的快速自动完成变为可能,最快速检测至多384个样品

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主要特点

  • 兼容多种反应规格,包括96孔,384孔和深孔反应板
  • 智能探针设计可最大限度减少堵塞和残留(<1%)(表1),有助于避免损伤仪器
  • 通过抽吸方式混合样品,可使样品均匀,维持细胞活性(表2)
  • 仪器关闭前进行自动管路清洁
  • 可在不同采集速率下获得一致的数据


性能数据

Attune® NxT 自动加样器的智能探针设计可最大限度减少堵塞和残留 (<1%) (表1),有助于避免损伤仪器,通过抽吸方式混合样品,可使样品均匀,维持细胞活性 (表2),自动进样器和单个试管间方便地切换,并保持数据的高度一致性(图1)。

  清洗次数和残留百分率
标准 1 wash
2 washes
3 washes
标准 0.01 0.01 0.01
高通量 0.02 0.02 0.02

表1. 使用Attune® NxT自动进样器时残留极低。将浓度为1 x 106个细胞/mL的Jurkat细胞加入96孔V形底反应板中,使用Attune® NxT自动进样器进行采样。在Attune® NxT声波聚焦流式细胞仪上分别采用标准模式 (200 μL/分钟) 和高通量模式 (500 μL/分钟) 的采样速率分析样品。每个样品混合一次,采集下个孔前将Attune® NxT自动进样器清洗1–3次。计算样品残留百分率。

  死细胞的百分比(%)
混合循环次数 LWB NIH/3T3
0
0.75 34.10
1
0.78 32.83
2
0.74 33.52
3
0.74 32.75
4
0.74 33.26
5
0.75 31.58

表2. 使用Attune® NxT自动进样器进行温和的样品混合:增加混合循环次数并不会对细胞活性造成不良影响。用2 μg/mL碘化丙啶对氯化铵裂解全血 (LWB) 和NIH/3T3 (活/经热处理) 细胞进行染色,并将其一式三份加入96孔V形底反应板中。采样前用Attune® NxT自动进样器混合样品0–5次,然后在Attune® NxT声波聚焦流式细胞仪上采用标准模式采集速率 (NIH/3T3:100 μL/分钟,LWB:200 μL/分钟) 分析样品。利用488 nm激光激发碘化丙啶,利用640 nm长通滤光片采集发射的荧光。无论采样前混合次数如何,每种细胞类型的差异都很小。



图1. 无论采用何种采样方法均可获得一致的结果。用小鼠抗人CD45 Pacific Orange™ (货号:MHCD4530)、小鼠抗人CD4 FITC (货号:MHCD0401) 和小鼠抗人CD8 R-PE (货号:MHCD0804) 抗体结合物标记氯化铵裂解全血。利用蓝光/紫光配置的Attune® 声波聚焦流式细胞仪分析标记样品,仪器配备的488 nm激光用于FITC (530 BP) 和R-PE (574/24 BP) 的荧光激发,405 nm激光用于Pacific Orange™ 染料 (603/48 LP) 的荧光激发。采用 (A) 试管模式或 (B) 反应板模式以200 μL/分钟的标准采集速率对同一样品 (包括补偿对照) 进行分析。采用CD45与侧向散射图对淋巴细胞设门,并分析CD4和CD8抗原的表达。单独在试管中进行分析与通过Attune® NxT自动进样器在反应板上进行分析的结果差异很小。


软件

利用 Attune® NxT软件设置实验十分简单。在虚拟反应板布局视图下,您可以创建补偿孔,进行仪器设置,以及标注样品。借助该软件,您还可以在一块反应板上设定多个实验,回收未使用的样品 (仅适用于通过试管模式采集的样品)。

直观的软件便于使用,可实现快速数据分析。例如,仪器采集数据时通过热图视图可进行快速筛选和样品确认 (图2)。

图2. 一致的孔间结果:Attune® NxT自动进样器的热图功能可发现96孔板上的参数异常。THP-1活细胞和经热灭活后的细胞均采用2 μg/mL碘化丙啶进行染色,然后加入96孔V形底反应板中,以500 μL/分钟的标准采集速率进行分析,每孔混合两次,孔间冲洗两次。采用488 nm激光 (640 LP) 进行碘化丙啶激发。(A) 在热图上,色彩渐变梯度以图形形式显示了碘化丙啶阳性细胞 (死细胞) 的百分比。红色孔表示该孔的分析样品中无碘化丙啶阳性细胞;紫红色孔表示样品中全部为碘化丙啶阳性细胞。(B) 热图上各孔的叠加值即为各孔中死细胞百分率的测定值。整块反应板上碘化丙啶荧光差异极小,全部数据组 (96孔) 的CV为1.44%。