用于流式细胞术的 Annexin V 试剂

快速、明确的细胞凋亡检测

Annexin V试剂可用于检测易位的磷脂酰丝氨酸(PS)——细胞凋亡的标志物之一。 Annexin V试剂可以与其他染料(包括核酸染料)联用,以准确分群检测凋亡细胞和非凋亡细胞 我们提供单独试剂或易用试剂盒形式的 Annexin V 偶联物。

使用 Annexin V 试剂通过流式细胞术检测细胞凋亡

我们与 Nexins Research Bv(荧光磷脂酰丝氨酸结合蛋白原开发商)合作,生产具有优异亮度的 Annexin V 偶联物。 这些 Annexin V 试剂为磷脂酰丝氨酸(是细胞凋亡中期标志)的具体化研究提供了快速可靠的检测方法。 凋亡细胞和未凋亡细胞经我们的荧光 Annexin V 偶联物染色后显示出的荧光强度是有差异的,经流式细胞仪测定发现这一差异通常约为100倍。

我们的 Annexin V 试剂的优势包括:

  • 可与Invitrogen Alexa Fluor和eFluor染料结合获得更明亮的信号
  • 可与所有可用激光结合,以提高多色流式方案组合
  • 可选择单独试剂或易用试剂盒形式
Annexin V试剂选择指南

用于流式细胞术的 Annexin V 试剂盒(单独试剂)

荧光偶联 激光器 发射 推荐滤片 尺寸
Annexin V, Alexa Fluor 350 UV 442 nm 450/40 nm 100 次检测
Annexin V, Pacific Blue 405/7 nm 455 nm 450/50 nm 100 个反应
Annexin V, Alexa Fluor 488 488 nm 519 nm 530/30 nm 100 个反应
Annexin V,荧光 488 nm 518 nm 530/30 nm 100 个反应
Annexin V, RPE 488 nm 578 nm 585/42 nm 50 个反应
Annexin V, Alexa Fluor 555 532 nm 565 nm 575/26 nm 100 个反应
Annexin V, Alexa Fluor 568 561 nm 603 nm 610/20 nm 100 个反应
Annexin V, Alexa Fluor 594 590 nm 617 nm 630/20 nm 100 个反应
Annexin V, APC 633/5 nm 665 nm 661/8 nm 100 个反应
Annexin V, Alexa Fluor 647 633/5 nm 660 nm 661/8 nm 50 个反应
Annexin V,生物素-X 偶联物 NA NA NA 100 个反应
所需缓冲液
Annexin 结合缓冲液 (5x)

含有 Annexin V 试剂的死细胞染色试剂盒

Annexin V试剂 死细胞染色剂 适当的最大荧光激发/发射光谱 试剂盒内的其他试剂 尺寸 货 号
Annexin V 试剂 死细胞染色剂
Annexin V, eFluor 450 405/450 nm NA Annexin 结合缓冲液 (10x) 50 个反应 88-8006-72
200 个反应 88-8006-74
Annexin V, Pacific Blue SYTOX AADvanced 415/455 nm 546/647 nm Annexin 结合缓冲液 (5x) 50 个反应 A35136
Annexin V, Alexa Fluor 488  PI 499/521 nm 535/617 nm

Annexin 结合缓冲液 (5x)

50 个反应 V13241
250 次检测 V13245
Annexin V, Alexa Fluor 488 SYTOX Green 499/521 nm 503/524 nm Annexin 结合缓冲液 (5x) 50 个反应 V13240
Annexin V,荧光 PI 494/518 nm 535/617 nm Annexin结合缓冲液 (5x) 50 个反应 V13242
Annexin V, PerCP-eFluor 710 482/710 nm NA Annexin 结合缓冲液 (10x) 50 个反应 88-8008-72
200 个反应 88-8008-74
Annexin V, APC SYTOX Green 650/660 nm 503/524 nm Annexin 结合缓冲液 (5x) 50 个反应 V35113
Annexin V, RPE SYTOX Green 488/575 nm 503/524 nm Annexin 结合缓冲液 (5x) 50个反应 V35112
Annexin V, RPE-Cyanine7 488/767 nm NA Annexin 结合缓冲液 (10x) 50 个反应 88-8103-72
200 个反应 88-8013-74
Annexin V, APC SYTOX Green 650/660 nm 503/524 nm

-Annexin 结合缓冲液 (5x)

--C12-resazurin (571/585 nm)

50 个反应 V35114
Annexin V 试剂反应
Annexin V Alexa Fluor 488 试剂

图1: Annexin V Alexa Fluor 488 试剂。 使用 10 μM 喜树碱处理 Jurkat 细胞(人类白血病 T 细胞)4 小时(右图)或未处理(作为对照,左图)。 然后用Annexin V Alexa Fluor 488处理细胞以鉴定凋亡细胞并用碘化丙啶鉴定死亡细胞,接着使用流式细胞仪分析。 需注意的是,经喜树碱处理的细胞(右图)中,凋亡细胞(用“A”表示)比例明显高于对照细胞(左图)中凋亡的基础水平。 V =活细胞,D=死细胞。

Annexin V Pacific Blue 试剂

图 2. Annexin V Pacific Blue 试剂 使用 10 µM 喜树碱处理 Jurkat 细胞(人类白血病 T 细胞)4小时。 然后用Pacific Blue Annexin V⁄SYTOX AADvanced 凋亡试剂盒中的试剂处理细胞,并使用流式细胞仪在405 nm和488 nm激发波长处分析。 注意:与对照组细胞群中的凋亡细胞基础水平 (1A) 相比,用喜树碱处理的细胞群中凋亡细胞的百分比更高(1B)。 A=凋亡细胞,V=活细胞,N=坏死细胞。

Annexin V PE 试剂

图 3. Annexin V PE 偶联物。 使用 10 µM 喜树碱诱导 Jurkat 细胞,然后在膜联蛋白结合缓冲液中洗涤细胞并用Annexin V PESYTOX Green染色。 使用流式细胞仪在 488 nm 波长处分析细胞。

染色实验方案

我们使用喜树碱处理的 Jurkat 细胞优化该实验以诱导细胞凋亡。 可能需要进行一些修改或与其他细胞类型联用。

  1. 制备膜联蛋白结合缓冲液: 10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4。
  2. 使用所需方法诱导细胞凋亡。 阴性对照应通过在不存在诱导剂的情况下孵育细胞来制备。
  3. 孵育期后采集细胞并在冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤。
  4. 将洗过的细胞沉淀,去除上清液,并将细胞重悬于膜联蛋白结合缓冲液中。 确定细胞密度并使用膜联蛋白结合缓冲液稀释至 ~1 × 106细胞/ 毫升,每次实验制备达100μL悬液。
  5. 每 100μL 细胞悬浮液中加入 5μL Annexin V偶联物。 您可能还需要添加适当的 Invitrogen 死细胞指示剂,例如碘化丙锭、SYTOX Green 染料或 SYTOX AADvanced 死细胞染料。
  6. 将细胞在室温下孵育 15 分钟。
  7. 孵育期后,加入 400μL 膜联蛋白结合缓冲液,轻轻混匀,并将样品保存在冰上。
  8. 尽快使用流式细胞仪分析染色的细胞。 用 Annexin V 与生物素-X 偶联试剂标记的细胞需要使用二级检测试剂,例如荧光团标记的链霉抗生物素蛋白。 细胞混合物应分成至少两组:仅具有低水平荧光的活细胞和显示出明显更高荧光强度的凋亡细胞。 如果使用死细胞染料,死细胞将被死细胞染料和 Annexin V 试剂标记。

资源

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支持

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