流式细胞术凋亡细胞质膜分析方法

一些可检测的最早的凋亡事件与质膜有关,包括不对称性和通透性的改变。 除膜联蛋白V结合物外,Life Technologies还可提供独特的分析方法,检测在膜联蛋白V结合较为困难的情况下质膜的变化,例如贴壁细胞以及未使用特殊的缓冲液时。

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膜联蛋白结合物

在凋亡细胞中,磷酯酰丝氨酸 (PS) 从质膜内侧转移到外侧,暴露在细胞外环境中。 荧光基团或生物素标记的膜联蛋白V可与暴露在质膜外侧的PS结合,用于识别凋亡细胞。 与其他具有相似光谱特性的有机染料相比,Alexa Fluor系列染料可形成更明亮、光稳定性更强的生物偶联物。

  • 与Molecular Probes染料结合,提高了灵敏度
  • 适用于各种激光的偶联物,提高了多重分析能力
  • 可作为单独的试剂或者易于使用的试剂盒提供

 

 


图1. Jurkat细胞 (人T细胞白血病细胞) 用10 μM喜树碱处理4小时 (右图) 或不处理 (左图) 用作对照。 用膜联蛋白V-Alexa Fluor 488处理细胞以识别凋亡细胞,用碘化丙啶处理以识别死细胞,然后进行流式细胞术分析。 结果显示经喜树碱处理的细胞 (下图) 中,凋亡细胞 (用“A表示) 的比例明显高于对照细胞 (上图) 中凋亡的基础水平。 A = 凋亡细胞,L = 活细胞,D = 死细胞。

偶联物 激光 激发/发射光波长 目录号  
Alexa Fluor 350 UV 346/442 A23202 产品详情
Pacific Blue™染料 405 410/455 A35122 产品详情
Alexa Fluor 488 488 495/519 A13201 产品详情
R-PE 488 496, 546, 565/578 A35111 产品详情
Alexa Fluor 555 532 555/565 A35108 产品详情
Alexa Fluor 568 561 578/603 A13202 产品详情
Alexa Fluor 647 633/5 650/660 A23204 产品详情

紫色不对称性探针

紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡检测试剂盒提供了一种利用紫色激光流式细胞仪简单高效地检测细胞凋亡与细胞死亡的方法。 紫色膜不对称性比率探针是一种新型可激发的紫色染料,用于检测凋亡过程中细胞膜的不对称性变化。 它用于贴壁细胞和悬浮细胞均可获得极佳的性能,且可与其他凋亡指示剂 (如caspase检测和线粒体膜电位改变) 相关联。

该染料能产生激发态分子内质子迁移 (ESIPT) 效应,产生波长为530 nm和585 nm的双发射光谱,可对表面电荷的变化产生双重颜色比率的响应。 F2N12S探针与SYTOX(R) AADvanced死细胞染料结合,该染料仅能够穿过晚期凋亡细胞或死细胞的细胞膜,从而将其与早期凋亡细胞区分开来。

与基于膜联蛋白的分析不同,该分析方法无需特殊的缓冲液或冲洗步骤,而且在对贴壁细胞分析时,它不易出现物理或化学清除步骤中常见的细胞膜损伤,从而可以提供更佳的数据质量。

  • 对胰蛋白酶消化细胞的准确凋亡分析
  • 简单的5分钟染色实验方案
  • 与其他蓝光激发凋亡染料可同时使用

 


图2. 紫色膜不对称性比率探针用于凋亡检测。 Jurkat细胞 (人T细胞白血病细胞) 用10 μM喜树碱处理4小时 (图B和图D) 或不处理 (图A和图C) 用作对照。 在流式细胞仪上用405 nm激光激发,对F2N12S用585 nm和530 nm的滤光片过滤,对SYTOX AADvanced™死细胞染料用488 nm激发,用695 nm的滤光片过滤。 可通过F2N12S两种发射光的相对强度把活细胞从死细胞或凋亡细胞中区分开来 (A和B)。 图C和图D部分是SYTOX AADvanced™死细胞荧光染色对F2N12S的两种发射光 (585/530 nm) 的比值作图。 A = 凋亡细胞,L = 活细胞,D = 死细胞。

产品 激光 激发/发射光波长 凋亡细胞染料 死细胞染料 目录号  
紫色膜不对称性比率探针/死细胞凋亡检测试剂盒 405 405/585 (活细胞),405/530 (凋亡细胞),546/647 (死细胞) F2N12S SYTOX AADvanced™ A35137 产品详情

单体花青染料

有些情况下,用膜联蛋白V对细胞进行染色并不是检测凋亡的最佳方法。 例如:细胞对膜联蛋白V结合所需的高钙浓度敏感、胰酶消化作用对贴壁细胞磷脂酰丝氨酸分析的不利影响、以及某些分析过程中禁止对样品进行清洗。

由于凋亡细胞膜不对称性的丧失会伴有通透性的改变,有三种单体花青染料 (PO-PRO™-1、YO-PRO-1和TO-PRO-3) 已证实可渗透进入凋亡细胞。 这些染料进入凋亡细胞后可以与核酸结合,而无法透过细胞的死细胞染料则被排除在细胞外。 这三种染料具有独特的激发波长,为多重分析提供了更大的灵活性。

  图3. 利用单体花青染料进行凋亡检测。 用10 µM喜树碱处理Jurkat细胞,诱导细胞凋亡。 然后用YO-PRO-1染料 (黄色) 处理细胞以检测凋亡细胞,或者用碘化丙啶处理检测死细胞,然后进行流式细胞术分析。

 

产品 激光 激发/发射光波长 目录号  
PO-PRO™-1碘化物 405 435/455 P3581 产品详情
YO-PRO-1碘化物 488 491/509 Y3603 产品详情
TO-PRO-3碘化物 633/5 642/661 T3605 产品详情

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