Caspase Assays for Flow Cytometry

Caspase酶活化是细胞凋亡早期的一个显著特征,其参与蛋白质底物的切割及随后的细胞分解。我们提供一系列caspase检测,可检测活细胞中的活性caspase。

另请参见Caspase成像检测


流式细胞Caspase检测试剂选择指南


CellEvent Caspase-3/7 流式细胞检测试剂

CellEvent Caspase-3/7流式细胞检测可采用新型的荧光caspase-3/7检测试剂,流式检测凋亡细胞之中活化的 caspase-3和caspase-7 (图 1).

  • Caspase-3/7特异性—包含活化的caspase-3和caspase-7的识别序列
  • 易于区别—可轻松区分活、死和凋亡细胞群
  • 快速分析—不需要洗涤和固定
  • 兼容性强—适用于488 nm激发波长
     

CellEvent Caspase-3/7为细胞透过性检测试剂。该试剂包含与核酸结合染料偶联的四氨基酸多肽(DEVD)。细胞凋亡期间,caspase-3和caspase-7蛋白激活,可切割DEVD多肽之中的编码caspase 3/7识别序列。随着识别序列断裂及DNA结合,该试剂可采用明亮的荧光标记凋亡细胞,最大吸收/发射光谱~511/533 nm(绿色荧光检测试剂)。结合适当的SYTOX死细胞染色剂使用时,可轻松区分活细胞及坏死细胞。

CellEvent Caspase-3/7 Green 流式细胞术检测

图1:采用CellEvent Caspase-3/7 Green流式细胞术检测试剂盒在Attune流式细胞仪上检测Jurkat细胞 Caspase活性。 采用(A) DMSO 或 (B) 10 µM喜树碱将Jurkat细胞(人源T细胞白血病)处理三个小时后,再使用CellEvent Caspase 3/7 Green流式细胞检测试剂盒其进行标记。在配备488-nm激光器的Attune声波聚焦流式细胞仪上分析染色样品,分别采用530/30 BP滤光片CellEvent Caspase 3/7 Green 检测试剂和690/50BP滤光片(SYTOX AADvanced染色剂)收集发射荧光。注意:与对照组细胞群中的凋亡细胞基础水平(A图)相比,用喜树碱处理的细胞群中凋亡细胞的百分比更高(B图)。

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Vybrant FAM Caspase检测试剂盒

Vybrant FAM Caspase检测试剂盒采用新型方法,基于caspases荧光抑制剂 (FLICA) 方法检测活细胞中的活性 caspases。Vybrant FAM Caspase检测试剂盒采用新型caspase抑制剂FLICA试剂,后者不可逆地与活性caspases之中的半胱氨酸共价结合,抑制酶的后续活性(图 2).

该检测方法使用简单,无需专用缓冲液裂解或透化细胞膜 - 直接将试剂加入细胞培养基,孵育1-4小时,洗涤细胞,然后分析即可。

  • 可以精确地检测活细胞中的活性caspase
  • 比annexin V法更可靠
  • 比TUNEL检测更简单
     
检测凋亡细胞中的活性caspase

图2:采用Vybrant FAM Caspase检测试剂盒检测活性caspase。未结合的FLICA试剂扩散出细胞并被洗涤掉。绿色荧光信号可用于直接测定加入抑制剂时存在的活性caspase量。

流式细胞术检测活细胞中的caspase活性

 

图3:流式细胞术检测活细胞中的活性caspase。采用10 μM喜树碱处理在37ºC和5% CO2件下处理Jurkat细胞4小时,采用FLICA试剂(caspase-3 和 caspase-7)及碘化丙啶染色(两种成分均来自于 Vybrant FAM Caspase-3和 -7检测试剂盒)。在488 nm激发波长处,采用530 nm旁通和670 nm长通发射滤光片在流式细胞仪上分析样品。

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