流式细胞术线粒体凋亡分析

细胞凋亡早期阶段的显著特征是线粒体的破裂,包括膜电位和氧化-还原电位的改变。 Life Technologies™ exclusively offers a number of Life Technologies™ fluorescent probes for analyzing mitochondrial activity in live cells by flow cytometry, with minimal disruption of cellular function.

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线粒体膜电位分析

MitoProbe™线粒体染料系列可以对凋亡过程中出现的线粒体膜电位丧失进行快速、简便而可靠的检测。

  • 使用方便且适用于现有的研究方案
  • 可用于多种细胞类型或激光激发源
  • 可提供适用于488 nm和633/635 nm激发波长的产品
  • 低补偿替代品

 

  图1. 使用MitoProbe™ DiIC1(5) 分析试剂盒检测线粒体膜电位的改变。加入羰基氰基3-氯苯腙 (CCCP),利用DiIC1(5) 荧光表示线粒体膜电位的下降。 仅用50 nM DiIC1(5) (蓝色) 或者在50 μM CCCP (红色) 存在的条件下对Jurkat细胞 (人T细胞白血病细胞) 进行染色。

 

产品 激光 激发/发射光波长 目录号  
MitoProbe™ DiOC2(3) 分析试剂盒 488 482/497 M34150 订购
MitoProbe™ JC-1 分析试剂盒 488 514/529 M34152 订购
MitoProbe™ DiIC1(5) 分析试剂盒 647 638/658 M34151 订购

线粒体膜电位可固定探针

MitoTracker染料是用于活细胞线粒体染色的膜电位依赖性探针。 MitoTracker染料在有活性的线粒体中产生的荧光信号比其在膜去极化的线粒体中产生的荧光信号强,这就提供了一种从一群细胞中识别出正常细胞的方法。

经过整个后续的流式细胞术免疫细胞化学、DNA末端标记、原位杂交或复染过程,MitoTracker染料的染色形态仍可保持。 MitoTracker Red CMXRos与绿色荧光染料配合使用时光谱重叠极少,而MitoTracker Orange CMTMRos可与远红外线荧光染料配合使用。


图2. 使用MitoTracker Red染料分析细胞凋亡过程中线粒体膜电位的下降。 在完全培养基中,Jurkat细胞 (人T细胞白血病细胞) 用10 μM喜树碱处理4小时 (A) 或不处理 (B)。 加入膜联蛋白V-Alexa Fluor 488检测膜不对称性的变化,加入MitoTracker Red染料检测线粒体膜电位的变化。 注意:与活细胞相比较,凋亡细胞对膜联蛋白V显示更高的结合活性和较低水平的MitoTracker Red染料荧光。

产品 激光 激发/发射光波长 目录号  
MitoTracker Orange CMTMRos 488 554/576 M7510 订购
MitoTracker Red CMXRos 488 579/599 M7512 订购

线粒体通透性转换孔分析

线粒体通透性转换孔 (MPTP) 是由线粒体内膜和外膜成分形成的非特异性通道,可能参与了细胞死亡过程中线粒体成分的释放。 相对于仅基于线粒体膜电位的分析来说,该分析试剂盒能更直接地检测线粒体通透性转换孔的开放。


图3. 利用MitoProbe™转换孔分析试剂盒对MPTP进行流式细胞仪分析。用MitoProbe™转换孔分析试剂盒对Jurkat细胞进行孵育,并通过流式细胞仪分析。 在不存在CoCl2和离子酶素的情况下,胞浆和线粒体内含有可发出荧光的钙黄绿素,从而发出明亮的信号 (左图)。 在CoCl2存在的情况下,线粒体内的钙黄绿素可发出信号,但胞浆内的钙黄绿素荧光被淬灭;总荧光量与单独的钙黄绿素相比有所下降 (中图)。 在加入钙黄绿素AM的同时将离子酶素 (离子酶素的钙载体) 和CoCl2加至细胞内,胞浆和线粒体内的荧光信号将被明显消除 (右图)。

产品 激光 激发/发射光波长 目录号  
MitoProbe™ 转换孔分析试剂盒 (MitoProbe™ Transition Pore Assay Kit) 488 514/529 M34153 订购

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