用于流式细胞术的Click-iT Plus EdU

代替您繁琐的BrdU检测法

Invitrogen Click-iT EdU细胞增殖分析试剂采用click 化学技术,可为新合成的DNA检测与定量提供比传统BrdU方法更优秀的替代物。 当在DNA合成过程中掺入修饰的核苷EdU(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)时,可以通过快速的“click化学”反应检测到它,并且对细胞的破坏作用最小。

Click-iT EdU技术

点击化学相比于BrdU具有更简便、更快速、更易操作的优点。 与使用溴脱氧尿苷(BrdU)检测法不同,Click-iT EdU检测法不是基于抗体,因此并不需要DNA变性以检测掺入的核苷。 此外,Click-iT EdU可以与R-PE、R-PE tandems 和GFP等荧光蛋白复用提高效力。当您平行比较这些方法时,Click-iT EdU和Invitrogen Click-iT Plus EdU在测定细胞增殖方面的优势是显而易见的。(表格1)

Click-iT EdU技术优势:

  • 快速—检测时间低至60分钟。
  • 准确—没有抗体和变性步骤产生的假信号。
  • 精简—简单六步方案。

Click-iT Plus EdU试剂盒优势:

  • 支持多色检测—可与R-PE(和双联体)及荧光蛋白兼容。

表1. Click-iT EdU、Click-it Plus EdU和BrdU检测法比较。

  Click-iT EdU试剂盒 Click-iT Plus EdU试剂盒 BrdU
多重 与大多数标准荧光染料(不包括FP和双联体)联用
与所有标准荧光染料(包括GFP和其他FP及敏感的双联体)联用
可变的
基础实验所需的试剂
出结果时间
(标记+检测)
通常 < 90分钟
5小时至过夜
步骤数
6
(无需多个破膜步骤,
不需要 Dnase 处理)
~10
DNA变性
需要

Click-iT Edu检测试剂盒选择指南

  Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理 作为传统BrdU检测的替代方法,将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。 使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料,通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。
多重 Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位(与BrdU方案不同)并且与标准抗体标记(小分子有机染料,如 FITC 或 Alexa Fluor染料,以及敏感的双联体,例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7),荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。
读取 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记 Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物 Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物
激光(nm) UV 405 488 532 或 561 633/635
Ex/Em (nm) 350/438 410/455 495/519 532 或 561/615 650/668
样品类型 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。
参考文献
产品规格 50 个反应 50 个反应 50 个反应 100 个反应 50 个反应 50 个反应 100 个反应
货 号 C10645 C10636 C10632 C10633 C10646 C10634 C10635
  Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理 标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC或Alexa Fluor染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。
多重 标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC 或 Alexa Fluor 染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。
若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容,我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。
读取 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记 Pacific Blue 叠氮化物 Alexa Fluor 488 叠氮化物 Alexa Fluor 647 叠氮化物
激光器 405 nm 488 nm 633/635 nm
Ex/Em (nm) 410/455 495/519 650/668
样品类型 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。
参考文献
产品规格 50 个反应 50 个反应 100 个反应 50个反应 100 个反应
货 号 C10418 C10424 C10420 C10425 C10419
  Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Pacific Blue 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 流式细胞分析试剂盒 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理 作为传统BrdU检测的替代方法,将修饰的胸苷类似物EdU掺入增殖细胞中新合成的DNA中。 使用明亮且光稳定的Invitrogen Alexa Fluor染料,通过快速、高度特异性的点击反应标记细胞。
多重 Click-iT EdU Plus试剂盒具有最大限度的多色检测性能。 温和的点击化学方案不会破坏细胞表位(与BrdU方案不同)并且与标准抗体标记(小分子有机染料,如 FITC 或 Alexa Fluor染料,以及敏感的双联体,例如 Invitrogen R-PE-Cy5或APC-Cy7),荧光蛋白和常见的细胞染色方法兼容。
读取 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记 Alexa Fluor 350 吡啶甲基叠氮化物 Pacific Blue 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 594 吡啶甲基叠氮化物 Alexa Fluor 647 吡啶甲基叠氮化物
激光(nm) UV 405 488 532 或 561 633/635
Ex/Em (nm) 350/438 410/455 495/519 532 或 561/615 650/668
样品类型 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。
参考文献
产品规格 50 个反应 50 个反应 50 个反应 100 个反应 50 个反应 50 个反应 100 个反应
货 号 C10645 C10636 C10632 C10633 C10646 C10634 C10635
  Click-iT EdU Pacific Blue流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 488流式细胞分析试剂盒 Click-iT EdU Alexa Fluor 647流式细胞分析试剂盒
检测基本原理 标准的Click-iT EdU 试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC或Alexa Fluor染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。
多重 标准的Click-iT EdU试剂盒兼容性有限;它们与有机染料标签(如FITC 或 Alexa Fluor 染料)兼容,但它们与荧光蛋白或 R-藻红蛋白(R-PE)和基于R-PE的双联体(即R-PE-Cy5结合物)不兼容。
若想与荧光蛋白和基于 APC 和 R-PE 的灵敏双联体兼容,我们建议使用 Click-iT EdU Plus 流式细胞分析试剂盒。
读取 荧光信号在EdU孵育期间合成DNA的细胞核中积累。
荧光标记 Pacific Blue 叠氮化物 Alexa Fluor 488 叠氮化物 Alexa Fluor 647 叠氮化物
激光器 405 nm 488 nm 633/635 nm
Ex/Em (nm) 410/455 495/519 650/668
样品类型 针对活细胞进行了优化,固定之后进行点击检测步骤。
参考文献
产品规格 50 个反应 50 个反应 100 个反应 50个反应 100 个反应
货 号 C10418 C10424 C10420 C10425 C10419

Click-iT EdU 流式细胞分析试剂盒背后的科学知识

Click-iT EdU 技术的优势在于化学方面 - 独特的小分子和低背景的标记物以及检测基团之间特异性共价反应。 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)是含有炔烃的核苷类似物。 在铜催化反应中,炔与染料标记的叠氮化物反应,形成稳定的共价键。 小分子的叠氮化物试剂可以有效地接触DNA而无需对细胞进行破坏处理。 这样大大地简化了测定,获得的结果与使用传统的BrdU相似(或更好)(图1和图2)

使用 Click-iT Plus EdU 进行细胞增殖分析


图1: 使用 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 流式细胞检测试剂盒和FxCycle Violet 染色剂进行细胞增殖分析。 根据 Invitrogen Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒操作步骤,用 10 μM EdU 处理 Jurkat 细胞1小时并用 Invitrogen Alexa Fluor 488 吡啶甲基叠氮化物染色,然后用Invitrogen Violet 染色剂染色。 使用 488 nm (Click-iT EdU Alexa Fluor 488 染色剂)或 405 488 nm (对于FxCycle Violet 染色剂)激发波长,通过流式细胞术分析细胞。 (A) 显示S期细胞(DNA合成、包括 EdU 掺入)和G2/M或G0/G1细胞明显分离的直方图。 (B) 显示使用 FxCycle Violet 染色剂时的 DNA 含量分布直方图,G0/G1 和 G2/M 期峰由 S 期分割。 (C) 显示共阳性细胞的双参数 Click-iT Plus EdU 和 FxCycle 图,直接测量S期细胞百分比。

用于流式细胞术的Click-iT Plus

图 2. 使用mCherry荧光蛋白和 FxCycle Far Red染色剂进行 Alexa Fluor 488 Click-iT Plus EdU标记。 将表达mCherry的A549细胞使用10 µM EdU处理2小时,并按照推荐的染色方案检测。 图 A 为用 Alexa Fluor 488吡啶叠氮化物标记的细胞的直方图,用于鉴定S期细胞。 图 B 和 C 分别为存在(图B)和不存在铜时(图C)的Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 吡啶叠氮化物标记细胞发出的mCherry荧光,证明在点击反应中mCherry荧光保留。 图 D 为 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488 和 Invitrogen FxCycle Far Red染色剂染色的DNA含量双参数图;共阳性的细胞处于S期。


Click-iT Plus EdU试剂兼容多色检测

与初代Click-iT EdU流式细胞检测相比,Click-iT Plus配方具有更好的多色兼容检测能力。 Click-iT Plus EdU检测可与R-PE和R-PE双联体,以及各种荧光蛋白(如GFP和mCherry)配合使用,同时还具有初代Click-iT EdU检测精确、快速的特点。

可与之联用的有:

  • 大多数标准荧光抗体
  • 敏感的 R-PE 荧光染料,如 R-PE-Cy7
  • GFP、mCherry 和其他荧光蛋白
  • 细胞表面和细胞内标记物
  • 细胞周期染料
Click-iT Plus EdU试剂的多重检测能力


图 3. 用于评估人类T细胞CD3和DNA链断裂的免疫表型分析实验结果。
 Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 488流式细胞检测试剂盒和 Hu CD3 PE-Cy7 荧光的双参数图。

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