Improved CFSE Alternatives for Cell Proliferation

Permanently label cells with Invitrogen CellTrace fluorescent stains without affecting morphology or physiology to trace generations or divisions in vivo or in vitro.

  • Superior performance—bright, single-peak staining enables visualization of multiple generations
  • Long-term signal stability—well retained in cells for several days post-stain
  • Non-cytotoxic—no known effect on proliferative ability or biology of cells
  • Versatile—multiple colors available to easily combine with antibodies or markers of cell function, such as GFP

View user guide

"CellTrace Violet is the best reagent for tracking proliferation in any amenable cell type by fluorescent dye dilution and flow cytometry. Compared to CFSE which is cytotoxic to cells when used at higher concentrations, CellTrace Violet labels cells brightly, with low toxicity and is faithfully distributed to daughter cells ensuring the best possible peak resolution.”

—Andrew Filby, Flow Cytometry Core Facility Manager and ISAC SRL Emerging Leader,
Newcastle University

Featured video

Multiplexing with the CellTrace Violet dye cell proliferation reagent

Dr. Andrew Filby, Ph.D. Flow Cytometry Core Facility Director at Newcastle University in the UK, shares his experience multiplexing the CellTrace Violet reagent as compared to CFSE to trace multiple generations by dye dilution using flow cytometry.

CellTrace Reagents for Cell Proliferation

Invitrogen CellTrace 荧光染料可永久标记细胞,且不影响细胞形态和生理学特性,追踪细胞在体内或体外进行传代或分裂的情况。

  • 性能卓越—明亮的单峰染色,观察多代细胞更准确
  • 信号稳定—染色后可在细胞内保留数天,可检测10代
  • 无毒性 —几乎不影响细胞的增殖能力和生物学特性
  • 灵活多用—有多种颜色可选,可与其他染料同时标记进行多色检测

CellTrace细胞增殖试剂盒选择指南

  CellTrace Violet 细胞增殖试剂盒 CellTrace CFSE细胞增殖试剂盒 CellTrace Yellow细胞增殖试剂盒 CellTrace Far Red细胞增殖试剂盒
检测原理 永久标记细胞,可在不影响细胞形态和生理学特性的前提下,追踪细胞在体内或体外进行传代或分裂的情况。
读值方法 根据细胞群内的荧光强度水平来确定从标记起开始细胞的传代次数。
荧光标记
CellTrace Violet
CFSE
CellTrace Yellow
CellTrace Far Red
激光 405 488 532, 561 633/635
Ex/Em (nm) 405/450 495/519 546/579 630/661
多重检测
包装规格
1 kit/180 tests
1 kit/180 tests
1 kit/180 tests
1 kit/180 tests
货号
C34557
C34554
C34567
C34564
参考文献

CellTrace细胞增殖试剂盒的工作原理

CellTrace细胞增殖试剂盒含有细胞膜通透性非荧光酯,可通过扩散透过细胞膜进入细胞,并与胺基反应形成荧光分子。这种无荧光的酯进入细胞后,可被胞内酯酶转化为荧光产物。活化的琥珀酰亚胺酯与蛋白质中的胺基基团共价结合,使染料能够长时间保留在细胞中。

经过后续细胞分裂阶段,各个子代细胞会从母细胞中接收到大约一半的荧光染料,从而可对体内标记且生长的细胞的荧光强度进行分析。

采用流式细胞仪对细胞群体的荧光强度进行分析,即可测定出自标记细胞起的传代次数(图1)

How CellTrace Cell Proliferation Kits work


图1. 细胞标记原理。 (A)
通过染料稀释分析细胞增殖. (B) 流式细胞检测分析显示了来自初始细胞群的明亮的同种荧光信号。在后续细胞分裂产生的大量细胞中,每个子代细胞都具有母细胞一半的荧光强度。


细胞代数检测更灵敏

在体外标记数天或约7-8个分裂周期后,CellTrace染料的信号仍未被细胞的自发荧光覆盖,其信号仍可被检测到。将CellTrace Violet细胞增殖试剂盒和配有紫激光器的流式细胞仪搭配使用时,最多可检测到10代细胞 (图2)

Sensitive detection of cell populations



图2. 人淋巴细胞染色. 使用10 µM CellTrace Violet对人CD8+ T淋巴细胞进行染色,使用OpTmizer™ T细胞扩增培养基在37°C下培养7天。每毫升细胞样本液中加入200 ng小鼠抗人CD3抗体和100 ng白介素-2刺激细胞。


用于多重分析实验更灵活

CellTrace细胞增殖试剂盒可分别适用于紫光、蓝光、黄光 (561 nm) 和红光激光器,研究人员可将细胞增殖分析与其他活细胞应用(如免疫分型、细胞分选和细胞周期分析)相结合同时检测,从而在单次实验中以最低的消耗获取最大量的数据信息。

CellTrace Violet (图4) 和CellTrace Far Red可与常用的绿色荧光染料,如FITC和Alexa Fluor™ 488或绿色荧光蛋白(GFP)等兼容。

Generational tracing using CellTrace reagents

图3. 使用CellTrace试剂追踪细胞传代。 在不同实验条件下追踪细胞增殖的不同代数, (A) 采用CellTrace Violet试剂对刺激7天的人外周血单核细胞(PBMC) 染色; (B) 采用CellTrace CFSE试剂对刺激5天的人T淋巴细胞染色; (C) 采用CellTrace Yellow试剂对刺激11天的人PBMC染色; (D) 采用CellTrace Far Red试剂对刺激5天的人T淋巴细胞染色。同时使用抗人CD3抗体 (货号MHCD0300) 和白介素-2(货号PHC0027)刺激PBMC,只使用抗人CD3抗体 (货号MHCD0300) 刺激人T淋巴细胞。未刺激的母代细胞分别以 (A) 红色峰、(B) 蓝色峰以及 (C)和(D)紫色峰表示。使用SYTOX死细胞染色剂排除每个数据组中的死细胞。使用Attune NxT声波聚焦流式细胞仪进行分析,三种试剂的激发光和检测通道分别如下: CellTrace Violet检测使用405 nm激光: 450/40 nm通道;CellTrace CFSE 检测使用488 nm激光: 530/30 nm通道;CellTrace Far Red 检测使用638 nm激光: 660/20 nm通道。CellTrace Yellow检测使用 561 nm激光:585/16 nm通道。

Compatibility of CellTrace Violet stain.

图4. CellTrace Violet染色剂的兼容性。在培养的非同期骨肉瘤细胞中,CellTrace Violet与GFP的光谱兼容性示例。 (A) 无GFP表达的未染色细胞。(B) 稳定表达GFP的未染色细胞。 (C) 使用5 µM CellTrace Violet染料染色且无GFP表达的细胞。(D)使用5 µM CellTrace Violet染色同时表达GFP的细胞。

资源

流式细胞术学习中心—获取流式细胞术学习资源以帮助您更好的计划和进行实验。

流式细胞配色工具beta—通过简单定制化体验的线上工具解决您流式多色试验的配色烦恼。

支持

流式细胞支持中心—查找流式细胞工作流程中各种技术支持,包括实验技巧和深入疑难解答等。

流式细胞实验方法

联系我们