显示两种不同的荧光峰的流式细胞术直方图部分

死细胞经常会因为可以与许多试剂发生非特异性结合而带来假阳性结果。 因此,从流式细胞仪数据中移除死细胞是帮助确保精确结果和分析的关键步骤。 Invitrogen 流式细胞分析不可固定细胞活性检测为研究者提供了一种可对活细胞和死细胞进行区分的方法,并比前向散射和侧向散射数据更为准确。

另请参见用于荧光成像微孔板的活力检测产品

利用非膜通透细胞的SYTOX DNA结合染料进行活力检测

Invitrogen SYTOX死细胞染色剂难以穿透完整的细胞膜且在与dsDNA结合后具有更强的荧光信号,因而成为我们最出色的死细胞染色剂(图 1)。 SYTOX死细胞染色剂在水相介质中不发荧光,因此在使用时仅需直接加入细胞中便可进行观察,并不需要洗涤步骤。该系列染色剂可提供多种颜色形式并兼容多种激光,具有高度灵活性。 这类染色剂可用于多种平台,包括荧光显微镜、流式细胞仪和微孔板。

不可通透细胞的SYTOX DNA结合染料选择指南

展示活/死细胞明显的荧光强度峰值差异的直方图,以及展示活细胞组中的亚群的其他散射图


图1: 用SYTOX 死细胞染色剂进行活细胞gating
。 在采用 488 nm和 635 nm 激发光进行流式细胞仪分析前,经热处理和未经热处理的人类外周血白细胞通过 Invitrogen Alexa Fluor 488 染料偶联的抗人CD3抗体、R-PE偶联的抗人CD8抗体以及 5 nM SYTOX Red 死细胞染色剂进行了染色。 (A) 展示两种细胞群分布的直方图 — 死细胞发出明显的 Invitrogen SYTOX Red 荧光信号,而活细胞并无荧光。 (B) 活细胞设门后CD8和CD3染色双参数图。


利用经典的非膜通透的SYTOX DNA结合染料进行活力检测

经典的非膜通透的DNA结合染料包括碘化丙啶(图 2)和 7-AAD。 这两种染料可被 488 或 532 nm 激光激发并在 610 nm 以上波长散射,因而广泛用于流式细胞术活性检测。

经典 DNA 结合染料选择指南

显示以下三种细胞群的流式细胞散点图:活性,凋亡和坏死

图 2. 采用碘化丙啶进行死细胞染色。 用 10 uM 喜树碱处理 Jurkat 细胞4小时,然后采用带有 Annexin V Alexa Flour 488 及碘化丙啶的死细胞凋亡试剂盒进行染色。 在 Invitrogen Attune 流式细胞仪上采用 488 nm 激发波长以及 530/30 和 575/24 带通滤波器对细胞进行分析,并用标准的 100 uL/min 收集速率进行收集。 死(坏死)细胞相对于凋亡或活细胞具有更高的碘化丙啶水平。 A = 凋亡细胞,V = 活细胞,N = 坏死细胞。


利用酯酶底物进行活性检测

Invitrogen CellTrace Calcein AM 染料可被动上样进粘附和非粘附的细胞中。 这些膜通透性的酯酶底物可作为活性探测器,检测激活荧光所必需的酶活性,以及相应荧光产品在细胞内发生滞留所必需的细胞膜完整性。 该染料可发蓝色、紫色以及绿色荧光,非常适合于活细胞的短期染色并用于多重流式细胞实验(图 3)

酯酶底物选择指南

展示两种细胞群清晰区分的流式细胞散点图:死细胞(红色荧光)和活细胞(绿色荧光)

图 3. CellTrace 钙黄绿素 AM 染色活细胞。 利用钙黄绿素 AM 和乙锭均二聚物-1 对乙醇固定的人的活 B 细胞混合物进行 1:1 染色。 5分钟后,用488 nm激发波长进行流式细胞仪分析。 二元频率分布结果显示标记有绿色荧光(530 nm)的活细胞群体和标记有红色荧光(585 nm)的死细胞群体被清晰的区别开来。


利用酯酶底物和胺反应染料进行活性检测

LIVE/DEAD Violet 细胞活力/活性检测试剂盒

Invitrogen LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测(图 4)。 Invitrogen CellTrace Calcein Violet AM 及Invitrogen LIVE/DEAD Fixable Aqua 荧光反应染料是适用于该应用的最佳染料;这两种染料均利用紫色激光,使得其他激光通道可用其他更为传统的标记。

了解活性/活力试剂盒的详细信息

展示两种清晰区分的细胞群的流式细胞散点图:活细胞(calcein 染色)和死细胞(aqua 荧光染料染色)

图4: 染色热灭活及未处理 Jurkat 细胞。 根据 LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒中的实验方法对 Jurket 胞进行染色。 采用带有 405 nm 激光的流式细胞仪对细胞进行分析:450/50 nm 带通滤光器用于calcein violet标记的活细胞 (L),525/50 nm 带通滤光器用于 auqa 染料标记的死细胞 (D)


用于流式细胞分析的非可固定活力染料选择指南
  SYTOX Blue 死细胞染色剂 SYTOX Green 死细胞染色剂 SYTOX Orange 死细胞染色剂 SYTOX AADvanced 死细胞染色试剂盒 SYTOX Red 死细胞染色剂 SYTOX 死细胞 试用装染色剂
检测基本原理 SYTOX 死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 这些染料在核酸结合前几乎没有荧光。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但必须加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。
读取 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。
激光(nm)
405
488
488
532
488
532
561
633/635
多种
Ex/Em (nm)
444/480
504/523
547/570
546⁄647
640/658
多种
参考文献 引用文献
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450结合使用 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP、CellTrace CSFE 染色剂或 LIVE/DEAD Fixable Green 染色剂结合使用 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与碘化丙啶、SYTOX orange 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与 Invitrogen APC、 Alexa Fluor 647、FxCycle Far Red 和 CellTrace Far Red 染色剂一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
1,000 个反应
1,000 个反应
1,000 个反应
参见下文
1,000 个反应
每中染色剂 50 个反应
货 号 100 个反应 (S10349),
500 个反应 (S10274)
  碘化丙啶 7-AAD(7-氨基放线菌素D)
检测基本原理 经典 DNA 结合死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但需要加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。
读取 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。
激光(nm)
488
532
488
532
Ex/Em (nm)
535/617
546/647
参考文献
引用文献
引用文献
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与 R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
100 mg
100 mg
货 号
  CellTrace Calcein Blue, AM CellTrace Calcein Violet, AM CellTrace Calcein Green, AM
检测基本原理 CellTrace calcein AM 染料在 AM 酯完整时不发荧光并可穿过所有细胞的细胞膜。 一旦进入活细胞后,活性酯酶将会切除 AM 基团并使得染料产生荧光。 死细胞中的 AM 基团不会被切除并且染料也不会发出荧光。 最佳的使用方式是采用短期标记作为染料,一旦 AM 基团被切除,便可在数小时内被主动转运至细胞外。
读取 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光可忽略不计
激光(nm)
UV
405
488
Ex/Em (nm)
322/425
400/452
495/515
参考文献
引用文献
引用文献
引用文献
多重
染料相容性 不可与 Indo-1(蓝色)、DAPI 或 Hoechst 33342 一起使用 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP或CellTrace CSFE 染色剂一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
20 x 50 µg
20 x 50 µg
20 x 50 µg
货 号
 
检测基本原理 LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测。
荧光标记 Calcein Violet, AM LIVE/DEAD Aqua 染色剂
读取 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光明显更弱 活细胞发出可忽略不计的荧光;死细胞发出高亮度荧光
激光(nm)
405
405
Ex/Em (nm)
400/452
367/526
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 不可与Invitrogen Pacific Green 染料、F2N12S 凋亡检测试剂盒、AmCyan 或 BV510 一起使用
可固定
 
样品类型
活细胞
产品规格
20 个反应
 
货 号
 
  SYTOX Blue 死细胞染色剂 SYTOX Green 死细胞染色剂 SYTOX Orange 死细胞染色剂 SYTOX AADvanced 死细胞染色试剂盒 SYTOX Red 死细胞染色剂 SYTOX 死细胞 试用装染色剂
检测基本原理 SYTOX 死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 这些染料在核酸结合前几乎没有荧光。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但必须加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。
读取 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。
激光(nm)
405
488
488
532
488
532
561
633/635
多种
Ex/Em (nm)
444/480
504/523
547/570
546⁄647
640/658
多种
参考文献 引用文献
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450结合使用 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP、CellTrace CSFE 染色剂或 LIVE/DEAD Fixable Green 染色剂结合使用 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与碘化丙啶、SYTOX orange 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 和 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与 Invitrogen APC、 Alexa Fluor 647、FxCycle Far Red 和 CellTrace Far Red 染色剂一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
1,000 个反应
1,000 个反应
1,000 个反应
参见下文
1,000 个反应
每中染色剂 50 个反应
货 号 100 个反应 (S10349),
500 个反应 (S10274)
  碘化丙啶 7-AAD(7-氨基放线菌素D)
检测基本原理 经典 DNA 结合死细胞染料可进入细胞膜受损的细胞并与 dsDNA/RNA 发生结合。 它们不能穿透完整的细胞膜并且不能进行固定。 它们可能还可用于固定细胞 DNA 含量细胞周期分析,但需要加入 RNase。 并可根据流式细胞分析结果轻松排除死细胞。
读取 死细胞具有高度的荧光;活细胞不会发生染色。
激光(nm)
488
532
488
532
Ex/Em (nm)
535/617
546/647
参考文献
引用文献
引用文献
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用 不可与 R-PE、碘化丙啶、SYTOX SYTOX Orange 死细胞染色剂、SYTOX AADvanced 染色剂、7-AAD、PE-Alexa Fluor 610 或 PE-Texas Red 串联染料一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
100 mg
100 mg
货 号
  CellTrace Calcein Blue, AM CellTrace Calcein Violet, AM CellTrace Calcein Green, AM
检测基本原理 CellTrace calcein AM 染料在 AM 酯完整时不发荧光并可穿过所有细胞的细胞膜。 一旦进入活细胞后,活性酯酶将会切除 AM 基团并使得染料产生荧光。 死细胞中的 AM 基团不会被切除并且染料也不会发出荧光。 最佳的使用方式是采用短期标记作为染料,一旦 AM 基团被切除,便可在数小时内被主动转运至细胞外。
读取 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光可忽略不计
激光(nm)
UV
405
488
Ex/Em (nm)
322/425
400/452
495/515
参考文献
引用文献
引用文献
引用文献
多重
染料相容性 不可与 Indo-1(蓝色)、DAPI 或 Hoechst 33342 一起使用 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 不可与 Invitrogen FITC、Alexa Fluor 488、GFP或CellTrace CSFE 染色剂一起使用
可固定
样品类型
活细胞
产品规格
20 x 50 µg
20 x 50 µg
20 x 50 µg
货 号
 
检测基本原理 LIVE/DEAD Violet 活性/活力试剂盒提供了一种双色荧光细胞活性和活力检测的方法,基于对细胞健康公认的标准——即代表细胞活性的质膜完整性以及细胞活力的胞内酯酶活力——对活细胞和死细胞同时进行检测。
荧光标记 Calcein Violet, AM LIVE/DEAD Aqua 染色剂
读取 活细胞发出高亮度荧光;死细胞荧光明显更弱 活细胞发出可忽略不计的荧光;死细胞发出高亮度荧光
激光(nm)
405
405
Ex/Em (nm)
400/452
367/526
多重
染料相容性 不可与 Invitrogen Pacific Blue 染料、CellTrace Violet 染色剂、 FxCycle Violet染色剂、LIVE/DEAD Fixable Violet 染色剂、BV421 或 eFluor 450 结合使用 不可与Invitrogen Pacific Green 染料、F2N12S 凋亡检测试剂盒、AmCyan 或 BV510 一起使用
可固定
 
样品类型
活细胞
产品规格
20 个反应
 
货 号
 

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