B-27 Plus 神经元培养体系

神经元细胞培养的标准 再度提升

细胞的存活率对于神经生物学研究的成功和可靠性至关重要。 Gibco B-27 Plus神经元培养体系由B-27 Plus添加剂和Neurobasal Plus培养基组成,可通过提高神经元存活率达50%以上来提升实验的可靠性。

了解一下其他研究人员是怎么说的 

  • 神经元存活率提高 50%— 业内最高
  • 神经突起生长加快
  • 改善了神经元的电生理活性和成熟度
     

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视频介绍

本页内容:

Gibco B-27 Plus 神经元培养体系包括

Gibco B-27 Plus Neuronal Culture System includes B-27 Plus Supplement and Neurobasal Plus Medium.

经验证配合使用效果最佳—可根据需要订购便利、高性价比的整套体系,或者按需要重新订购单独的组分

经验证可以无缝替代其他神经元培养体系,如经典的常规版B-27添加剂和神经元基础培养基,同时无需改动现有工作流程:

  • 可维持原代大鼠、小鼠和人PSC来源及胚胎来源的神经元
  • 使人PSC来源和胚胎来源的神经干细胞 (NSC) 分化成神经元
     

关键优势和代表数据

相比经典产品,神经元存活率可提高50%以上

B-27 Plus培养体系相对于其他神经元细胞培养体系可增加神经元的存活率。

图 1. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基,B-27 Plus神经元培养体系可以维持更高的神经元存活率。 Gibco大鼠原代皮质神经元在上述培养体系中培养3周,并分别在7、14和21天时对MAP2进行免疫染色。

B-27 Plus神经元培养体系可实现一流的原代细胞和iPSC分化神经元细胞培养。

图 2. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基,B-27 Plus神经元培养体系对原代啮齿来源及诱导多能干细胞 (iPSC) 来源的神经元培养效果更好。 冻存的神经元在上述培养体系中培养3–4周。 在指定的时间点,采用神经元树突标记物 MAP2(绿色)和神经元细胞体标记物 HuC/D(红色)进行免疫染色。 细胞核使用 DAPI(蓝色)复染。

改善了电生理活性和成熟度

B-27 Plus神经元培养体系可在不同时间内展现出高度同步的神经元活性。

图 3. 相对于BrainPhys神经元培养基和SM1试剂盒,电生理活性显著提升。 原代大鼠皮质神经元接种于48孔多电极阵列 (MEA) 板上。 按照供应商推荐的实验方案,将细胞在上述培养基体系中培养35天。 使用Axion BioSystems™ Maestro™ MEA平台全程记录自发性电生理活性。 数据来源于四次平行实验的一次,每次实验的趋势相近。 B-27 Plus神经元培养体系可长期维持一致、稳定、高度同步的自发性电生理活性。

在健康的神经元细胞培养中增强神经元的成熟度。

图 4. 神经元成熟度相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基增强。 原代大鼠皮质神经元在生长22天时,采用树突标记物MAP2(红色)和突触素 1/2染色,标记突触前末梢(绿色)。 在B-27 Plus神经元培养体系中维持的神经元的点状突触阳性信号明显更高。

B-27 Plus神经元培养体系可促进神经网络活性的提高。

图 5. B-27 Plus神经元培养体系可促进神经活性的提高。 原代大鼠皮层神经元细胞在B27 Plus体系中进行了35天的体外培养,并每2-3天进行培养基半量更换。 在培养基更换24小时后采用Axion BioSystems Maestro Pro™ 微电极芯片(MEA)平台进行记录。 B-27 Plus体系展现出了在整个芯片范围内(参见活性地图,左侧)的神经覆盖以及较强的同步化网络形状,正如在栅格图(活性地图,右侧)中所示。 (数据由Axion Biosystems所产生。

相对于替代培养基体系,可实现最高的神经元存活率

图 6. 与其他市售无血清神经元培养基体系相比,B-27 Plus神经元培养体系可在神经元长期培养应用中达到最高的细胞存活率。 将已成熟9天的原代大鼠皮质神经元原代大鼠海马体神经元原代小鼠皮质神经元和人 iPSC 来源神经元冻存后 (HIP™ Neurons, MTI-GlobalStem) ,在含 B-27添加剂的经典Neurobasal神经元基础培养基中复苏。 将神经元接种于多聚D-赖氨酸包被的96孔板上,根据供应商推荐的实验方案分别使用 B-27 Plus神经元培养体系和其他无血清培养基体系维持3-4周。 在神经元培养3或4周时,采用Invitrogen HuC/HuD单克隆抗体免疫荧光染色,定量神经元存活率。 显示的数据来自于三次平行实验的一次,每次运行均显示,与其他替代体系相比,B-27 Plus神经元培养体系可实现最高的神经元细胞存活率。

图 7. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基及替代培养基体系,可加速神经突触生长。 在含有B-27添加剂的经典Neurobasal神经元基础培养基中复苏原代小鼠皮质神经元并接种于多聚-D-赖氨酸包被的96孔板上。 按照供应商推荐的实验方案,分别使用大约3周的含有经典B-27添加剂的Neurobasal神经元基础培养基、含有B-27 Plus添加剂的Neurobasal Plus培养基以及其他市售无血清培养基体系中维持神经元。 在指定时间点拍摄微分干涉对比图,用以定量神经突触生长情况。 相对于含有B-27添加剂的经典神经元基础培养基, B-27 Plus神经元培养体系在前几周可显著加速神经突触生长。 显示的数据来自于其中三次平行实验的一次,每次运行均显示使用1周B-27 Plus神经元培养体系的平均神经突触长度高过替代体系。

客户故事

原代小鼠海马神经元 (MHN) 在添加了B-27 Plus 添加剂的Neurobasal Plus培养基中按标准条件培养了 28 天。 这些细胞展现出了健康的形态并且没有观察到神经突破碎。 所有在 体内观察到的树突棘形态也都可以在细胞培养中被观察到。 我会非常明确地推荐Neurobasal Plus培养基以及 B-27 Plus添加剂用于原代神经元的长期培养。

— Susanne Zach,勃林格殷格翰CNS研究

Susanne Zach
Professor Hideyuki Okano
在B-27 Plus体系里培养的神经元相对于其他培养条件看上去更为健康,并具有更长、更为完整的神经突。 我们对于这种新的培养体系非常满意并计划在我们的实验中继续使用,因为我们相信它会帮助我们在对于 NSC 和 iPSC 分化神经元的研究带来更高的效率。

—  Professor Hideyuki Okano,MD,PhD,日本东京庆应义塾大学医学部

我们的原代大鼠皮层神经培养中,B-27 Plus神经元培养体系可在MEA板中几乎每一个电极上产生稳定的神经活性。 神经网络激活事件十分有规律性并且具有极高的强度,使得在对功能性神经活性进行评估时数据分析更为简单和直接。

— Jim Ross,Axion BioSystems CTO

Jim Ross
John Graef
相比于我们使用BrainPhys培养基的标准制备方法,B-27 Plus培养基可为我们的人类iPSC分化神经元带来更高水平的同步多电极芯片活性。 我发现B-27 Plus培养基在需要基于同步神经元活性对电生理表型进行鉴定时,代表了一种极佳的细胞培养体系选择。

— John Graef,PhD,Fulcrum Therapeutics首席科学家

相比经典产品,神经元存活率可提高50%以上

B-27 Plus培养体系相对于其他神经元细胞培养体系可增加神经元的存活率。

图 1. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基,B-27 Plus神经元培养体系可以维持更高的神经元存活率。 Gibco大鼠原代皮质神经元在上述培养体系中培养3周,并分别在7、14和21天时对MAP2进行免疫染色。

B-27 Plus神经元培养体系可实现一流的原代细胞和iPSC分化神经元细胞培养。

图 2. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基,B-27 Plus神经元培养体系对原代啮齿来源及诱导多能干细胞 (iPSC) 来源的神经元培养效果更好。 冻存的神经元在上述培养体系中培养3–4周。 在指定的时间点,采用神经元树突标记物 MAP2(绿色)和神经元细胞体标记物 HuC/D(红色)进行免疫染色。 细胞核使用 DAPI(蓝色)复染。

改善了电生理活性和成熟度

B-27 Plus神经元培养体系可在不同时间内展现出高度同步的神经元活性。

图 3. 相对于BrainPhys神经元培养基和SM1试剂盒,电生理活性显著提升。 原代大鼠皮质神经元接种于48孔多电极阵列 (MEA) 板上。 按照供应商推荐的实验方案,将细胞在上述培养基体系中培养35天。 使用Axion BioSystems™ Maestro™ MEA平台全程记录自发性电生理活性。 数据来源于四次平行实验的一次,每次实验的趋势相近。 B-27 Plus神经元培养体系可长期维持一致、稳定、高度同步的自发性电生理活性。

在健康的神经元细胞培养中增强神经元的成熟度。

图 4. 神经元成熟度相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基增强。 原代大鼠皮质神经元在生长22天时,采用树突标记物MAP2(红色)和突触素 1/2染色,标记突触前末梢(绿色)。 在B-27 Plus神经元培养体系中维持的神经元的点状突触阳性信号明显更高。

B-27 Plus神经元培养体系可促进神经网络活性的提高。

图 5. B-27 Plus神经元培养体系可促进神经活性的提高。 原代大鼠皮层神经元细胞在B27 Plus体系中进行了35天的体外培养,并每2-3天进行培养基半量更换。 在培养基更换24小时后采用Axion BioSystems Maestro Pro™ 微电极芯片(MEA)平台进行记录。 B-27 Plus体系展现出了在整个芯片范围内(参见活性地图,左侧)的神经覆盖以及较强的同步化网络形状,正如在栅格图(活性地图,右侧)中所示。 (数据由Axion Biosystems所产生。

相对于替代培养基体系,可实现最高的神经元存活率

图 6. 与其他市售无血清神经元培养基体系相比,B-27 Plus神经元培养体系可在神经元长期培养应用中达到最高的细胞存活率。 将已成熟9天的原代大鼠皮质神经元原代大鼠海马体神经元原代小鼠皮质神经元和人 iPSC 来源神经元冻存后 (HIP™ Neurons, MTI-GlobalStem) ,在含 B-27添加剂的经典Neurobasal神经元基础培养基中复苏。 将神经元接种于多聚D-赖氨酸包被的96孔板上,根据供应商推荐的实验方案分别使用 B-27 Plus神经元培养体系和其他无血清培养基体系维持3-4周。 在神经元培养3或4周时,采用Invitrogen HuC/HuD单克隆抗体免疫荧光染色,定量神经元存活率。 显示的数据来自于三次平行实验的一次,每次运行均显示,与其他替代体系相比,B-27 Plus神经元培养体系可实现最高的神经元细胞存活率。

图 7. 相对于B-27添加剂和Neurobasal神经元基础培养基及替代培养基体系,可加速神经突触生长。 在含有B-27添加剂的经典Neurobasal神经元基础培养基中复苏原代小鼠皮质神经元并接种于多聚-D-赖氨酸包被的96孔板上。 按照供应商推荐的实验方案,分别使用大约3周的含有经典B-27添加剂的Neurobasal神经元基础培养基、含有B-27 Plus添加剂的Neurobasal Plus培养基以及其他市售无血清培养基体系中维持神经元。 在指定时间点拍摄微分干涉对比图,用以定量神经突触生长情况。 相对于含有B-27添加剂的经典神经元基础培养基, B-27 Plus神经元培养体系在前几周可显著加速神经突触生长。 显示的数据来自于其中三次平行实验的一次,每次运行均显示使用1周B-27 Plus神经元培养体系的平均神经突触长度高过替代体系。

客户故事

原代小鼠海马神经元 (MHN) 在添加了B-27 Plus 添加剂的Neurobasal Plus培养基中按标准条件培养了 28 天。 这些细胞展现出了健康的形态并且没有观察到神经突破碎。 所有在 体内观察到的树突棘形态也都可以在细胞培养中被观察到。 我会非常明确地推荐Neurobasal Plus培养基以及 B-27 Plus添加剂用于原代神经元的长期培养。

— Susanne Zach,勃林格殷格翰CNS研究

Susanne Zach
Professor Hideyuki Okano
在B-27 Plus体系里培养的神经元相对于其他培养条件看上去更为健康,并具有更长、更为完整的神经突。 我们对于这种新的培养体系非常满意并计划在我们的实验中继续使用,因为我们相信它会帮助我们在对于 NSC 和 iPSC 分化神经元的研究带来更高的效率。

—  Professor Hideyuki Okano,MD,PhD,日本东京庆应义塾大学医学部

我们的原代大鼠皮层神经培养中,B-27 Plus神经元培养体系可在MEA板中几乎每一个电极上产生稳定的神经活性。 神经网络激活事件十分有规律性并且具有极高的强度,使得在对功能性神经活性进行评估时数据分析更为简单和直接。

— Jim Ross,Axion BioSystems CTO

Jim Ross
John Graef
相比于我们使用BrainPhys培养基的标准制备方法,B-27 Plus培养基可为我们的人类iPSC分化神经元带来更高水平的同步多电极芯片活性。 我发现B-27 Plus培养基在需要基于同步神经元活性对电生理表型进行鉴定时,代表了一种极佳的细胞培养体系选择。

— John Graef,PhD,Fulcrum Therapeutics首席科学家

推荐应用

B-27 Plus 添加剂和 Neurobasal Plus 培养基采用与当前目录产品同一的包装,并采用与之完全相同的实验方案。 经典 B-27 和 Neurobasal 神经元基础培养基产品仍会继续供货;但在以下应用中,我们建议采用 Plus 版搭配其他培养基和添加剂的组合:

实验应用 推荐的添加剂 推荐的基础培养基
出生前/胚胎原代神经元的维持/成熟 B-27 Plus 添加剂 Neurobasal Plus 培养基
干细胞来源神经元的分化及维持/成熟 B-27 Plus 添加剂

CultureOne 添加剂
Neurobasal Plus 培养基
电生理学研究 B-27 Plus 添加剂 Neurobasal Plus 培养基
新生儿和成体大脑神经元的维持/成熟 B-27 Plus 添加剂 Neurobasal-A 培养基
氧化应激及损伤、凋亡的研究,或自由基对神经元损伤的情形 B-27 添加剂,无抗氧化剂 Neurobasal Plus 培养基

B-27 Plus 体系成本效益

与经典的B27添加剂和Neurobasal神经元培养基相比,B-27 Plus神经元培养体系更具性价比。

  B-27添加剂和Neurobasal培养基 B-27 Plus神经元培养体系
体系价格 * $155 $182
体系体积 500 mL 500 mL
维持96孔板神经元2周所需的体积 60 mL 60 mL
每个体系单元的板数 8 8
每板成本 * $19 $22
神经元相对存活率 (%B-27) 100% 150%
同等数量神经元的总成本* $19 $15
* 基于美元价格比较

订购信息

常见问答

问题 答案
有何区别 B-27 Plus 添加剂和经典 B-27 添加剂? B-27 Plus添加剂针对经典B-27的配方进行了优化。 B-27 未添加小分子或生长因子。
Neurobasal Plus培养基和Neurobasal神经元基础培养基有何区别? Neurobasal Plus培养基中的主要氨基酸和缓冲组分进行了优化。 未添加小分子或生长因子。
你们如何升级生产/质检工艺? 我们简化了生产流程,实施了更严格的验收标准并采用更严格的质检方法检验原材料的纳入和终产品的发布,实现了更好的批次间一致性。
我可以将 B-27 Plus分装重新冷冻,以便今后使用吗? 可以,但我们建议您在初次解冻时分存。 同时,我们建议冻融循环不要超过2次。
我可以采用B-27 Plus神经元培养体系扩增增殖细胞吗,如神经干细胞? 不可以,我们不建议采用B-27 Plus体系扩增增殖细胞。 我们建议采用StemPro NSC SFM、神经诱导培养基添加剂或B-27添加剂(不含维生素 A)培养增殖细胞,如NSCs。
我可以使用B-27 Plus体系维持神经元多久? 我们维持原代大鼠皮层神经元达8周,维持大鼠海马体神经元达4周。 小鼠皮质神经元可维持4周。 人iPSC来源神经元(MTI-GlobalStem 的 HIP™ 神经元)维持5周。 所有采用B-27 Plus体系测试的细胞在所有时间点的健康程度均明显强于经典产品。
我必须要将B-27 Plus搭配Neurobasal Plus使用 吗? B-27 Plus添加剂和Neurobasal Plus培养基设计初衷就是为了协同配合实现最佳性能。 但他们仍可根据需要搭配其他基础培养基或添加剂使用。
我该如何控制培养体系中的神经胶质细胞的数目? 在培养第0天在 B-27 Plus神经元培养体系中添加 CultureOne添加剂,以完全抑制星形胶质细胞和少突细胞,同时对神经元无影响。 延迟到较晚的时间点加入CultureOne,会导致星形胶质细胞水平增加。 更多信息请见CultureOne添加剂用户指南。
我可以采用B-27 Plus神经元培养体系培养非神经元细胞吗? 我们未采用其他细胞进行过测试,B-27 Plus体系就是为了培养神经元细胞而设计的。
我可以采用B-27 Plus和Neurobasal Plus替代哪些经典B-27和Neurobasal神经元基础培养基产品? 可替换以下实验方案之中的常规版B-27添加剂和 Neurobasal 神经元基础培养基(非去除胰岛素、去除维生素A或Neurobasal-A 等的特殊版):
- 维持原代大鼠、小鼠及人PSC来源和胚胎来源的神经元
- 人PSC来源和胚胎来源的神经干细胞 (NSC) 分化成神经元
添加了Neurobasal Plus的完整培养基可在多长时间内使用? 完整的Neurobasal Plus培养基应在补充B-27 Plus添加剂后4周内使用。
融解的B-27 Plus添加剂可在4℃下保存吗? 可以,B-27 Plus添加剂可在融解后在4℃条件下储存达2周。
B-27 Plus添加剂和Neurobasal Plus培养基的保质期为多久? 1年
如果我的细胞未贴壁或出现结块怎么办? 在原代神经元培养中,这通常是包被不均匀或神经元接种密度过高所致。 在NSC分化实验中,这可能是由于神经前体细胞过渡增殖所致。 采用 B-27 Plus神经元培养体系和CultureOne添加剂的组合进行分化,可以消除75%以上的神经前体细胞及其结块现象。 更多信息请见CultureOne添加剂。
HuC/D是什么? HuC/D是一种专用于神经元细胞体的抗体, 可用来定量培养液中的神经元。
我该如何融解B-27 Plus添加剂? 在4℃下过夜解冻,或者在室温下解冻2小时。 我们不建议采用水浴或培养箱解冻。
在37℃水浴或培养箱中解冻B-27 Plus添加剂会有什么后果? 不建议这么做。
我该如何为在B-27 Plus神经元培养体系之中的细胞补充培养液? 接种后每2-3天置换一半的培养基。 置换时请勿完全移除培养基,以免神经元完全暴露在空气中。

资源

实验方案

应用资料

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