限制酶酶切和 DNA 修饰
通过限制酶酶切和连接的克隆是一种将双链 DNA 片段从一个质粒转移至另一质粒的简单、便捷方法。
首先：
- 选择限制酶，其识别序列位于您感兴趣基因的侧翼
- 按照推荐时长对反应进行孵育
- 纯化相应片段
- 将片段连接至您感兴趣的质粒
Anza™ 限制酶克隆系统
包含限制酶和 DNA 修饰酶的完整系统——极致简约，完美克隆。
- 所有限制酶使用一种统一的缓冲液
- 所有 DNA 类型使用同一酶切方案
- 15 分钟即可完成酶切
- 即使过夜酶切也不会出现星号活性
Anza 缓冲液
常规限制酶
限制性内切酶 (RE) 可以切割双链 DNA中特定的 4-8 碱基对的反向重复识别序列。 DNA 切割的产物为平末端或者包含 5′ 或 3′ 突出端。
DNA 修饰酶
连接酶
不管限制性内切酶切形成的末端类型如何，切割得到的 DNA 片段末端均含有 3´ 羟基和 5´ 磷酸基。 在依赖 ATP 的反应中，DNA 连接酶可以共价地连接双链 DNA（或 RNA）的 5’ 磷酸基和 3’ 羟基。
碱性磷酸酶
碱性磷酸酶可水解 DNA 和 RNA 的 3′ 和 5′ 磷酸基。 它适用于在末端标记前去除 5′ 磷酸基以及在插入连接片段前将载体去磷酸化。 它也可用于将蛋白质去磷酸化。
末端修复
末端修复用于将带有 5’ 或 3’ 突出端的 DNA 转变为 5’ 端磷酸化的平末端 DNA，以便有效将其连接至平末端克隆载体。
聚合酶
聚合酶用于产生平末端 DNA 和/或整合标记 DNA。