利用TOPO快速高效地完成PCR克隆

将PCR扩增的DNA片段 (带有A突出端或平末端) 直接连接至超过40种亚克隆、测序或表达载体内,只需5分钟即可完成——获得多达95%的重组克隆。

 
  • 快速——避免了低效率的连接反应,省去了费力的限制性酶搜索工作
  • 高效——可以获得多达95%的重组克隆,最大程度减少了集落筛选
  • Troubleshooting tool - if it can’t be cloned with TOPO, it can't be cloned

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TOPO cloning protocol


图1. TOPO克隆步骤。 TOPO PCR克隆只需三个简单的步骤。 将PCR产物与TOPO克隆载体混合,等待五分钟,然后转化入大肠杆菌

步骤 Topo TA 克隆试剂盒 TA/UA 克隆 限制性酶切连接法
使用现有引物?
载体是否可直接用于克隆?
包含连接试剂?
单独制备或购买感受态细胞吗? 不,已包括在内 购买: 0小时
制备: 长达 6 小时
购买: 0小时
制备: 长达 6 小时
连接时间 5 分钟, 1 小时)。 2 - 23小时
重组效率 高达 95% 60 - 80% ~60%
克隆所需时间 5 分钟, 1 - 12小时 2 - 23小时