最为巧妙的DNA凝胶纯化方法

  • 简单3步对您的DNA进行凝胶纯化
  • 大大提升克隆效率
  • 电泳过程中实时观察条带,并使DNA损伤降至最低
  • 从同一凝胶泳道上收集多个DNA条带

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E-Gel CloneWell II 凝胶和 E-Gel Power Snap电泳系统适用

简单3步完成DNA的凝胶纯化

E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶为双梳凝胶。将样品加入上面一排孔中,开始电泳,直至条带迁移至底部一排孔中 (图1)。然后只需用移液器将您的纯化DNA条带吸出,便可用于克隆。整个过程就是这样简单。无需再采用其他纯化试剂盒或步骤。使用Invitrogen E-Gel Power Snap电泳系统— 一个配有内置电源和蓝光透射仪的紧凑型独立设备,来运行和显示E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶。

Three easy steps for separation and isolation of DNA bands with E-Gel CloneWell II agarose gels

图 1.利用E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶只需三个简单的步骤即可完成DNA条带的分离和回收。将样品加到上面一排孔中,随着凝胶电泳的进行,条带逐渐分开。当目标条带进入底部一排孔后,可用移液枪将其收集起来。E-Gel Power Snap系统具有具有反向电泳功能,即使您感兴趣的条带已经穿过收集孔,也可利用此功能回收此条带。

获得更高的克隆效率

成像过程中,DNA样品暴露在紫外光下会导致DNA损伤,并降低克隆效率。与传统方法相比,使用E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶与E-Gel Power Snap 系统可消除紫外线损伤并提高克隆效率。 如图2所示,使用E-Gel CloneWell II凝胶纯化和传统方法,然后使用TOPO TA克隆试剂盒获得的结果比较。

图 2.使用E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶和蓝光透射仪可获得更高的克隆效率。分别利用E-Gel CloneWell琼脂糖凝胶或含有EB的传统琼脂糖凝胶分离含有850 bp扩增子的PCR产物。利用蓝光透射仪显示从E-Gel CloneWell琼脂糖凝胶中回收的DNA条带。利用紫外线显示传统凝胶中分离的DNA,先用刀片将凝胶薄片切下,然后使用凝胶提取试剂盒进行DNA提取。两种实验方法中,DNA在光源下的曝光时间均为15, 30,或60秒。两种方法获得的片段样品都使用 TOPO TA克隆试剂盒 (目录号K460040)进行克隆,且转化进入Invitrogen MultiShot TOP10化学感受态细胞 (目录号No. C40005)。图中显示了两种方法在每个时间点的平均菌集落形成单位(CFU)数。

从同一个凝胶泳道上收集多个DNA条带

使用E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶,您可从相同的样品/泳道中重新收集多重DNA条带,从而节省材料和时间。您可以省去切取凝胶条带以及使用多柱进一步提取凝胶的麻烦。使用 E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶,当条带迁移进入收集孔后,可将其逐一回收。无需额外纯化步骤。

实时观察条带,并使DNA损伤最小化

使用含有SYBR Safe DNA凝胶染料的E-Gel琼脂糖凝胶,通过E-Gel Power Snap系统可实时观察DNA条带迁移。不同于紫外光,该系统中使用的蓝光可最大限度降低DNA损伤 (图3)

图 3.使用SYBR Safe DNA凝胶染料和蓝光透射仪可最大限度降低DNA损伤。分别使用蓝光(Safe Imager 2.0蓝光透射仪)或紫外光对经SYBR Safe DNA凝胶染料或EB染色的等量超螺旋DNA进行一定时间的曝光,然后使用琼脂糖凝胶电泳进行评估。迁移缓慢的DNA片段表明是由DNA切口或链断裂造成的线性或松弛环状载体。

简单3步完成DNA的凝胶纯化

E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶为双梳凝胶。将样品加入上面一排孔中,开始电泳,直至条带迁移至底部一排孔中 (图1)。然后只需用移液器将您的纯化DNA条带吸出,便可用于克隆。整个过程就是这样简单。无需再采用其他纯化试剂盒或步骤。使用Invitrogen E-Gel Power Snap电泳系统— 一个配有内置电源和蓝光透射仪的紧凑型独立设备,来运行和显示E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶。

Three easy steps for separation and isolation of DNA bands with E-Gel CloneWell II agarose gels

图 1.利用E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶只需三个简单的步骤即可完成DNA条带的分离和回收。将样品加到上面一排孔中,随着凝胶电泳的进行,条带逐渐分开。当目标条带进入底部一排孔后,可用移液枪将其收集起来。E-Gel Power Snap系统具有具有反向电泳功能,即使您感兴趣的条带已经穿过收集孔,也可利用此功能回收此条带。

获得更高的克隆效率

成像过程中,DNA样品暴露在紫外光下会导致DNA损伤,并降低克隆效率。与传统方法相比,使用E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶与E-Gel Power Snap 系统可消除紫外线损伤并提高克隆效率。 如图2所示,使用E-Gel CloneWell II凝胶纯化和传统方法,然后使用TOPO TA克隆试剂盒获得的结果比较。

图 2.使用E-Gel CloneWell II 琼脂糖凝胶和蓝光透射仪可获得更高的克隆效率。分别利用E-Gel CloneWell琼脂糖凝胶或含有EB的传统琼脂糖凝胶分离含有850 bp扩增子的PCR产物。利用蓝光透射仪显示从E-Gel CloneWell琼脂糖凝胶中回收的DNA条带。利用紫外线显示传统凝胶中分离的DNA,先用刀片将凝胶薄片切下,然后使用凝胶提取试剂盒进行DNA提取。两种实验方法中,DNA在光源下的曝光时间均为15, 30,或60秒。两种方法获得的片段样品都使用 TOPO TA克隆试剂盒 (目录号K460040)进行克隆,且转化进入Invitrogen MultiShot TOP10化学感受态细胞 (目录号No. C40005)。图中显示了两种方法在每个时间点的平均菌集落形成单位(CFU)数。

从同一个凝胶泳道上收集多个DNA条带

使用E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶,您可从相同的样品/泳道中重新收集多重DNA条带,从而节省材料和时间。您可以省去切取凝胶条带以及使用多柱进一步提取凝胶的麻烦。使用 E-Gel CloneWell II琼脂糖凝胶,当条带迁移进入收集孔后,可将其逐一回收。无需额外纯化步骤。

实时观察条带,并使DNA损伤最小化

使用含有SYBR Safe DNA凝胶染料的E-Gel琼脂糖凝胶,通过E-Gel Power Snap系统可实时观察DNA条带迁移。不同于紫外光,该系统中使用的蓝光可最大限度降低DNA损伤 (图3)

图 3.使用SYBR Safe DNA凝胶染料和蓝光透射仪可最大限度降低DNA损伤。分别使用蓝光(Safe Imager 2.0蓝光透射仪)或紫外光对经SYBR Safe DNA凝胶染料或EB染色的等量超螺旋DNA进行一定时间的曝光,然后使用琼脂糖凝胶电泳进行评估。迁移缓慢的DNA片段表明是由DNA切口或链断裂造成的线性或松弛环状载体。

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