Northern 印迹杂交分析可提供关于RNA 特性、大小和丰度的信息,从而更深入地了解基因表达水平。我们的Invitrogen™ 产品组合是业界最全面的Northern 印迹分析产品之一。从可制备高品质、完整RNA 的Invitrogen™ TRIzol™试剂,到无RNA 酶试剂和Invitrogen™ BrightStar™-Plus 膜,这些产品可满足您所有的Northern 印迹分析需求,助您缩短获得结果所需的时间。

分子生物基础试剂促销

Northern 印迹杂交分步指南

RNA 分离

获得高品质的完整RNA 是进行Northern 印迹杂交的关键步骤。用于分离RNA 的所有protocol、技术和市售试剂盒都具有以下共同特征:

  • 裂解细胞和破坏膜
  • 核糖核酸酶活性的抑制
  • 脱蛋白
  • 回收完整RNA

 

RNA 分离产品

IS10008 iPrep™ PureLink® 病毒试剂盒 K156001 PureLink® 血液总RNA 试剂盒
AM1934 LeukoLOCK™ 总RNA 分离系统 12280-050 PureLink® 病毒RNA/DNA 小抽试剂盒
AM1840 MagMAX™ 总核酸分离试剂盒 AM1975 RecoverAll™ FFPE 样品总核酸分离试剂盒
AM1839 MagMAX™-96微阵列总RNA 分离试剂盒 AM1925 RiboPure™-细菌/酵母试剂盒
AM1830 MagMAX™-96总RNA 分离试剂盒 AM1926 RiboPure™-酵母试剂盒
AM1936 MagMAX™-96病毒RNA 分离试剂盒  AM1928 RiboPure™-血液试剂盒
AM1983 MELT™总核酸分离系统 AM1912 RNAqueous® 试剂盒
AM9690 植物RNA 分离辅助  AM1931 RNAqueous®-微量提取试剂盒
12322012 植物RNA 试剂 4380204 Tempus® Spin RNA 分离试剂盒
12173011A PureLink® Pro 96总RNA 纯化试剂盒 10296010 TRIzol® LS 试剂
122800-96A PureLink® Pro 96病毒RNA/DNA 纯化试剂盒 16096-020 TRIzol® Max™ 细菌/酵母RNA 分离试剂盒
12183016 PureLink® RNA 微量提取试剂盒 12183555 TRIzol® Plus RNA 纯化系统
12183018A PureLink® RNA 小抽试剂盒 15596026 TRIzol® 试剂

 

查看RNA分离试剂选择指南

探针生成

RNA探针可在体外通过使用Invitrogen™ MAXIscript™ 试剂盒转录反应生成。使用该试剂盒进行合成期间,可直接整合同位素或非同位素标记的核苷酸,或者对RNA 进行无标记合成,随后使用补骨脂素-生物素处理,生成用于印迹杂交的生物素化探针。

技术注意事项:
当使用RNA探针而不是DNA 探针进行Northern 印迹分析时,我们建议进行多次调整以获得最佳结果。其中包括:

  • 所用膜的类型
  • 适合RNA 的杂交缓冲液
  • 升高杂交和洗涤温度
  • 探针技术。

 

探针生成产品

AM1308M MAXIscript® SP6试剂盒,附带使用手册
AM1320M MAXIscript® SP6⁄T7试剂盒(每盒15次反应),附带使用手册
AM1316M MAXIscript® T3试剂盒,附带使用手册
AM1312M MAXIscript® T7试剂盒,附带使用手册
AM1324M MAXIscript® T7⁄T3试剂盒(每盒15次反应),附带使用手册

变性

分离出RNA 样品后,Northern 印迹分析的下一步是使琼脂糖凝胶电泳变性。甲醛一直被用作电泳的传统变性剂。Invitrogen™ NorthernMax™ 试剂盒包含一套完整的无RNA 酶试剂,用于含甲醛的琼脂糖凝胶电泳。使用甲醛的缺点在于需要在通风橱内倾倒和电泳。使用Invitrogen™ NorthernMax™-Gly 试剂盒,RNA 样品在乙二醛/ DMSO 中变性,不存在与甲醛有关的安全性问题。

我们提供多种RNA ladders 可用于准确预估mRNA 的分子量大小,包括 Invitrogen™ Millennium™ RNA Markers。查看关于RNA ladders的更多信息。

 

变性产品

AM7785 Millennium™ 标记物探针模板 750018 50x Denhardt’s solution
AM8676 NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液 750023 UltraPure™ DEPC 处理水
AM8552 NorthernMax® 甲醛上样染料(1 mL试管) 10977-015 UltraPure™ 无DNase/RNase 蒸馏水
AM1940 NorthernMax® 试剂盒 16550100 UltraPure™ 琼脂糖1000
AM8672 NorthernMax®1 小时转印缓冲液 14476028 UltraPure™ 0.5M EDTA, pH 8.0
AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液 24740011 UltraPure™ 5M NaCl
AM8678 NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液 15506017 UltraPure™ Tris HCl
AM1946 NorthernMax®-Gly 试剂盒 15557036 UltraPure™ 20X SSC
AM8551 NorthernMax®-Gly 样品上样染料(1 mL试管) 15591035 UltraPure™ 20X SSPE

固相载体转印和固定

完成变性琼脂糖凝胶电泳分离后,将RNA 转印到带正电荷的尼龙膜上并固定,用于后续杂交。为实现快速、可重复的转印,iBlot 干转系统可在7分钟内将RNA完全转印到尼龙膜上。使用干转法时,无需使用其他缓冲液或液体,从而不会对结果造成差异。

此外,我们提供了一种快速的碱性转印方法,其被并入NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒。该转印方法代替了过夜转印,只需要2小时即可将RNA(特别是较大的转录物)高效转印到膜上,具有更高的印迹灵敏性。NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒经过优化,可与BrightStar Plus 带正电尼龙膜配合使用,它们能够最大限度地降低背景和增强信号。请注意,硝酸纤维素膜与NorthernMax 转印缓冲液在化学上不兼容,不应与这些试剂盒一起使用。

 

固相载体转印和固定产品

AM10100 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(15 x 15 cm)
AM10104 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(大卷,30 cm x 3 m)
AM10102 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(小卷,30 x 45 cm)
15515-025 UltraPure™ 甲酰胺
AM9342 甲酰胺(去离子)
LC2003 Novex® 带正电尼龙膜,045微米(8.3 x 7.3 cm)

探针预杂交和杂交

Invitrogen™ NorthernMax™和NorthernMax™-Gly 试剂盒包含ULTRAhyb™ 超灵敏杂交缓冲液,可用于预杂交和杂交。尽管双链DNA 探针在使用前必须变性,但RNA 探针和单链DNA 探针可以用少量的ULTRAhyb™ 缓冲液稀释,然后再加到预杂交印迹中。与其他杂交溶液相比,ULTRAhyb 缓冲液提高杂交完成程度且不增加背景,可将灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个分子。由于ULTRAhyb 缓冲液最大限度地提高了印迹的灵敏度,所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。


探针预杂交和杂交产品

AM8676 NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液
AM8552 NorthernMax® 甲醛上样染料(1 ml试管)
AM1940 NorthernMax® 试剂盒
AM8672 NorthernMax® 1小时转印缓冲液
AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8678 NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液
AM1946 NorthernMax®-Gly 试剂盒
AM8551 NorthernMax®-Gly 样品上样染料(1 ml试管)

洗涤

杂交后,使用缓冲液洗涤多次,除去未杂交的探针。低严格度洗涤(如,使用2X SSC或SSPE)可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤(如,使用0.1X SSC或SSPE)可除去部分杂交分子。经认证无RNA酶的低和高严格度洗涤缓冲液包含在NorthernMax 试剂盒中,也可单独购买。

 

洗涤产品

AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8670 ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液, 125 mL
AM8669 ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液,4 x 125 mL
AM8663 ULTRAhyb®-Oligo

 

 

检测

BrightStar™ BioDetect™ 非同位素检测试剂盒为检测生物素化RNA 和DNA 探针提供了所有所需试剂和材料。NorthernMax 试剂盒NorthernMax 试剂盒经过优化,可与BrightStar BioDetect 试剂盒一起使用,用于超灵敏非同位素Northern 印迹,具有高信噪比和低背景。这种优化的Northern 印迹法也可以获得出色的放射性标记探针检测结果。


检测产品

AM1930 BrightStar® BioDetect™ Kit

RNA 分离

获得高品质的完整RNA 是进行Northern 印迹杂交的关键步骤。用于分离RNA 的所有protocol、技术和市售试剂盒都具有以下共同特征:

  • 裂解细胞和破坏膜
  • 核糖核酸酶活性的抑制
  • 脱蛋白
  • 回收完整RNA

 

RNA 分离产品

IS10008 iPrep™ PureLink® 病毒试剂盒 K156001 PureLink® 血液总RNA 试剂盒
AM1934 LeukoLOCK™ 总RNA 分离系统 12280-050 PureLink® 病毒RNA/DNA 小抽试剂盒
AM1840 MagMAX™ 总核酸分离试剂盒 AM1975 RecoverAll™ FFPE 样品总核酸分离试剂盒
AM1839 MagMAX™-96微阵列总RNA 分离试剂盒 AM1925 RiboPure™-细菌/酵母试剂盒
AM1830 MagMAX™-96总RNA 分离试剂盒 AM1926 RiboPure™-酵母试剂盒
AM1936 MagMAX™-96病毒RNA 分离试剂盒  AM1928 RiboPure™-血液试剂盒
AM1983 MELT™总核酸分离系统 AM1912 RNAqueous® 试剂盒
AM9690 植物RNA 分离辅助  AM1931 RNAqueous®-微量提取试剂盒
12322012 植物RNA 试剂 4380204 Tempus® Spin RNA 分离试剂盒
12173011A PureLink® Pro 96总RNA 纯化试剂盒 10296010 TRIzol® LS 试剂
122800-96A PureLink® Pro 96病毒RNA/DNA 纯化试剂盒 16096-020 TRIzol® Max™ 细菌/酵母RNA 分离试剂盒
12183016 PureLink® RNA 微量提取试剂盒 12183555 TRIzol® Plus RNA 纯化系统
12183018A PureLink® RNA 小抽试剂盒 15596026 TRIzol® 试剂

 

查看RNA分离试剂选择指南

探针生成

RNA探针可在体外通过使用Invitrogen™ MAXIscript™ 试剂盒转录反应生成。使用该试剂盒进行合成期间,可直接整合同位素或非同位素标记的核苷酸,或者对RNA 进行无标记合成,随后使用补骨脂素-生物素处理,生成用于印迹杂交的生物素化探针。

技术注意事项:
当使用RNA探针而不是DNA 探针进行Northern 印迹分析时,我们建议进行多次调整以获得最佳结果。其中包括:

  • 所用膜的类型
  • 适合RNA 的杂交缓冲液
  • 升高杂交和洗涤温度
  • 探针技术。

 

探针生成产品

AM1308M MAXIscript® SP6试剂盒,附带使用手册
AM1320M MAXIscript® SP6⁄T7试剂盒(每盒15次反应),附带使用手册
AM1316M MAXIscript® T3试剂盒,附带使用手册
AM1312M MAXIscript® T7试剂盒,附带使用手册
AM1324M MAXIscript® T7⁄T3试剂盒(每盒15次反应),附带使用手册

变性

分离出RNA 样品后,Northern 印迹分析的下一步是使琼脂糖凝胶电泳变性。甲醛一直被用作电泳的传统变性剂。Invitrogen™ NorthernMax™ 试剂盒包含一套完整的无RNA 酶试剂,用于含甲醛的琼脂糖凝胶电泳。使用甲醛的缺点在于需要在通风橱内倾倒和电泳。使用Invitrogen™ NorthernMax™-Gly 试剂盒,RNA 样品在乙二醛/ DMSO 中变性,不存在与甲醛有关的安全性问题。

我们提供多种RNA ladders 可用于准确预估mRNA 的分子量大小,包括 Invitrogen™ Millennium™ RNA Markers。查看关于RNA ladders的更多信息。

 

变性产品

AM7785 Millennium™ 标记物探针模板 750018 50x Denhardt’s solution
AM8676 NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液 750023 UltraPure™ DEPC 处理水
AM8552 NorthernMax® 甲醛上样染料(1 mL试管) 10977-015 UltraPure™ 无DNase/RNase 蒸馏水
AM1940 NorthernMax® 试剂盒 16550100 UltraPure™ 琼脂糖1000
AM8672 NorthernMax®1 小时转印缓冲液 14476028 UltraPure™ 0.5M EDTA, pH 8.0
AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液 24740011 UltraPure™ 5M NaCl
AM8678 NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液 15506017 UltraPure™ Tris HCl
AM1946 NorthernMax®-Gly 试剂盒 15557036 UltraPure™ 20X SSC
AM8551 NorthernMax®-Gly 样品上样染料(1 mL试管) 15591035 UltraPure™ 20X SSPE

固相载体转印和固定

完成变性琼脂糖凝胶电泳分离后,将RNA 转印到带正电荷的尼龙膜上并固定,用于后续杂交。为实现快速、可重复的转印,iBlot 干转系统可在7分钟内将RNA完全转印到尼龙膜上。使用干转法时,无需使用其他缓冲液或液体,从而不会对结果造成差异。

此外,我们提供了一种快速的碱性转印方法,其被并入NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒。该转印方法代替了过夜转印,只需要2小时即可将RNA(特别是较大的转录物)高效转印到膜上,具有更高的印迹灵敏性。NorthernMax 和NorthernMax-Gly试剂盒经过优化,可与BrightStar Plus 带正电尼龙膜配合使用,它们能够最大限度地降低背景和增强信号。请注意,硝酸纤维素膜与NorthernMax 转印缓冲液在化学上不兼容,不应与这些试剂盒一起使用。

 

固相载体转印和固定产品

AM10100 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(15 x 15 cm)
AM10104 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(大卷,30 cm x 3 m)
AM10102 BrightStar®-Plus 带正电尼龙膜(小卷,30 x 45 cm)
15515-025 UltraPure™ 甲酰胺
AM9342 甲酰胺(去离子)
LC2003 Novex® 带正电尼龙膜,045微米(8.3 x 7.3 cm)

探针预杂交和杂交

Invitrogen™ NorthernMax™和NorthernMax™-Gly 试剂盒包含ULTRAhyb™ 超灵敏杂交缓冲液,可用于预杂交和杂交。尽管双链DNA 探针在使用前必须变性,但RNA 探针和单链DNA 探针可以用少量的ULTRAhyb™ 缓冲液稀释,然后再加到预杂交印迹中。与其他杂交溶液相比,ULTRAhyb 缓冲液提高杂交完成程度且不增加背景,可将灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个分子。由于ULTRAhyb 缓冲液最大限度地提高了印迹的灵敏度,所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。


探针预杂交和杂交产品

AM8676 NorthernMax® 10X 变性凝胶缓冲液
AM8552 NorthernMax® 甲醛上样染料(1 ml试管)
AM1940 NorthernMax® 试剂盒
AM8672 NorthernMax® 1小时转印缓冲液
AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8678 NorthernMax®-Gly 10X 凝胶制备/电泳缓冲液
AM1946 NorthernMax®-Gly 试剂盒
AM8551 NorthernMax®-Gly 样品上样染料(1 ml试管)

洗涤

杂交后,使用缓冲液洗涤多次,除去未杂交的探针。低严格度洗涤(如,使用2X SSC或SSPE)可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤(如,使用0.1X SSC或SSPE)可除去部分杂交分子。经认证无RNA酶的低和高严格度洗涤缓冲液包含在NorthernMax 试剂盒中,也可单独购买。

 

洗涤产品

AM8677 NorthernMax® 预杂交/杂交缓冲液
AM8670 ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液, 125 mL
AM8669 ULTRAhyb® 超敏杂交缓冲液,4 x 125 mL
AM8663 ULTRAhyb®-Oligo

 

 

检测

BrightStar™ BioDetect™ 非同位素检测试剂盒为检测生物素化RNA 和DNA 探针提供了所有所需试剂和材料。NorthernMax 试剂盒NorthernMax 试剂盒经过优化,可与BrightStar BioDetect 试剂盒一起使用,用于超灵敏非同位素Northern 印迹,具有高信噪比和低背景。这种优化的Northern 印迹法也可以获得出色的放射性标记探针检测结果。


检测产品

AM1930 BrightStar® BioDetect™ Kit

无缓冲液的干式转印

 

iBlot 干转系统

  • 节省时间—通常可在7分钟内完成DNA 或RNA 转印
  • 可重复—一致的制备和运行条件
  • 方便—无需繁琐的缓冲液制备过程

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技术说明

  • 技术说明14(2):Northern杂交分析:使用ULTRAhyb 技术从印迹中获取更多信息:我们证明通过选择更灵敏的杂交缓冲液,可以显着增加Northern 印迹上与探针杂交的目标分子百分比。

技术文献

 

应用说明

 

 

仅供研究使用。不可用于诊断程序。