Southern 印迹分析可提供关于DNA 特性、大小和丰度的信息。这种经典技术根据DNA 大小,通过电泳对DNA 片段进行分离,并将其转印到膜上,与标记的序列特异性探针杂交,洗涤,最后检测标记DNA 条带。我们为Southern 杂交分析提供了最全面的产品组合之一。

从可靠的限制酶到快速便捷的E-Gel™预制琼脂糖凝胶电泳系统和BrightStar™Plus膜, 我们的产品不仅有助于满足您的Southern 印迹分析需求,还可以加快实验进程。

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Southern 印迹杂交分步指南

第1步:DNA 消化

在目标限制酶切位点获得完整的DNA 片段是Southern 印迹杂交中的关键步骤。我们提供了一系列高品质DNA 限制性内切酶,可帮助您获得清晰、明确的Southern 印迹数据。每种限制内切酶经验证都可以使用同一种通用缓冲液(L,M,H,K或T(+ BSA)),并提供推荐缓冲液。

 

推荐工具:

第2步:凝胶电泳

DNA 片段通常在琼脂糖凝胶上电泳,并根据片段分子量进行分离。也可以使用丙烯酰胺凝胶,其对小片段DNA(<800bp)的分辨率较好。

E-Gel®琼脂糖凝胶电泳系统非常适用于限制性酶切消化、PCR 反应和质粒制备的快速、高分辨率电泳。该系统包括凝胶电泳底座以及实时电泳观察设备。该系统利用E-Gel®预制凝胶以及即用型电极和核酸染料。无需灌注凝胶,无需制备缓冲液,无需组装凝胶盒。只需将DNA 样品上样,并开始电泳。了解关于E-Gel®预制琼脂糖凝胶电泳系统的更多信息。

我们提供多种DNA ladders 可用于准确预估DNA 的分子量大小,包括100 bp ladders 和1 Kb Plus ladders。了解关于凝胶电泳DNA ladders 的更多信息。

 

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第3步: 转印

电泳后,将DNA 转印到带正电尼龙膜上。素探针一起使用,可获得最大的杂交信号。传统方法利用正向转印方法将DNA 转印过夜。为获得可靠和一致的转印结果并最小化背景,强烈建议使用BrightStar®-Plus带正电尼龙膜。该膜适合与放射性标记和非同位素探针一起使用,可获得最大的杂交信号。

为实现快速、可重复的转印,iBlot®7-Min Blot 可在7分钟内将DNA 完全转印到尼龙膜上。使用iBlot®系统,无需其他缓冲液或液体,从而不会对结果造成差异。

 

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第4步:探针标记

对于具有与目标序列同源序列的核酸探针,使用放射性、荧光染料或酶(与相应底物孵育可产生化学发光信号)进行标记。标记物的选择取决于多种因素,如探针或探针模板的性质、所需的灵敏度、定量要求、易用性和实验时间等。

 

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第5步:杂交&洗涤

杂交期间,在促进互补序列杂交的条件下将标记探针与固定在印迹膜上的DNA 片段一起孵育。与其他杂交溶液相比,ULTRAhyb®超灵敏杂交缓冲液在预杂交和杂交时可促进杂交且不增加背景,使灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个目标分子。由于ULTRAhyb®缓冲液最大程度地提高了印迹的灵敏度,所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。

杂交后,使用缓冲液洗涤多次,除去未杂交的探针。低严格度洗涤(如,使用2X SSC或SSPE)可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤(如,使用0.1X SSC或SSPE)可除去部分杂交的分子探针。结果是只有完全杂交的标记探针分子与目标区域的互补序列保持结合。

 

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第6步:检测

在检测步骤中,使用所用标记物对应的方法检测结合的标记探针。例如,可以使用X射线胶片或磷光成像仪器检测放射性标记探针,以及通过孵育化学发光底物并将印迹曝光到X射线胶片来检测酶标记探针。

BrightStar®BioDetect™ 试剂盒包含检测生物素化DNA探针所需的试剂和材料。这套完整的试剂盒经过优化,可与BrightStar®-Plus膜一起使用,提供了可兼容Southern、Northern和点印迹的低背景、高灵敏度、非同位素检测。BrightStar®BioDetect™ 试剂盒利用一种最明亮和寿命最长的化学发光底物——CDP-Star® 底物——具有最高的灵敏度,并且可在2天内进行多次曝光。

 

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第1步:DNA 消化

在目标限制酶切位点获得完整的DNA 片段是Southern 印迹杂交中的关键步骤。我们提供了一系列高品质DNA 限制性内切酶,可帮助您获得清晰、明确的Southern 印迹数据。每种限制内切酶经验证都可以使用同一种通用缓冲液(L,M,H,K或T(+ BSA)),并提供推荐缓冲液。

 

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第2步:凝胶电泳

DNA 片段通常在琼脂糖凝胶上电泳,并根据片段分子量进行分离。也可以使用丙烯酰胺凝胶,其对小片段DNA(<800bp)的分辨率较好。

E-Gel®琼脂糖凝胶电泳系统非常适用于限制性酶切消化、PCR 反应和质粒制备的快速、高分辨率电泳。该系统包括凝胶电泳底座以及实时电泳观察设备。该系统利用E-Gel®预制凝胶以及即用型电极和核酸染料。无需灌注凝胶,无需制备缓冲液,无需组装凝胶盒。只需将DNA 样品上样,并开始电泳。了解关于E-Gel®预制琼脂糖凝胶电泳系统的更多信息。

我们提供多种DNA ladders 可用于准确预估DNA 的分子量大小,包括100 bp ladders 和1 Kb Plus ladders。了解关于凝胶电泳DNA ladders 的更多信息。

 

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第3步: 转印

电泳后,将DNA 转印到带正电尼龙膜上。素探针一起使用,可获得最大的杂交信号。传统方法利用正向转印方法将DNA 转印过夜。为获得可靠和一致的转印结果并最小化背景,强烈建议使用BrightStar®-Plus带正电尼龙膜。该膜适合与放射性标记和非同位素探针一起使用,可获得最大的杂交信号。

为实现快速、可重复的转印,iBlot®7-Min Blot 可在7分钟内将DNA 完全转印到尼龙膜上。使用iBlot®系统,无需其他缓冲液或液体,从而不会对结果造成差异。

 

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第4步:探针标记

对于具有与目标序列同源序列的核酸探针,使用放射性、荧光染料或酶(与相应底物孵育可产生化学发光信号)进行标记。标记物的选择取决于多种因素,如探针或探针模板的性质、所需的灵敏度、定量要求、易用性和实验时间等。

 

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第5步:杂交&洗涤

杂交期间,在促进互补序列杂交的条件下将标记探针与固定在印迹膜上的DNA 片段一起孵育。与其他杂交溶液相比,ULTRAhyb®超灵敏杂交缓冲液在预杂交和杂交时可促进杂交且不增加背景,使灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个目标分子。由于ULTRAhyb®缓冲液最大程度地提高了印迹的灵敏度,所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。

杂交后,使用缓冲液洗涤多次,除去未杂交的探针。低严格度洗涤(如,使用2X SSC或SSPE)可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤(如,使用0.1X SSC或SSPE)可除去部分杂交的分子探针。结果是只有完全杂交的标记探针分子与目标区域的互补序列保持结合。

 

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第6步:检测

在检测步骤中,使用所用标记物对应的方法检测结合的标记探针。例如,可以使用X射线胶片或磷光成像仪器检测放射性标记探针,以及通过孵育化学发光底物并将印迹曝光到X射线胶片来检测酶标记探针。

BrightStar®BioDetect™ 试剂盒包含检测生物素化DNA探针所需的试剂和材料。这套完整的试剂盒经过优化,可与BrightStar®-Plus膜一起使用,提供了可兼容Southern、Northern和点印迹的低背景、高灵敏度、非同位素检测。BrightStar®BioDetect™ 试剂盒利用一种最明亮和寿命最长的化学发光底物——CDP-Star® 底物——具有最高的灵敏度,并且可在2天内进行多次曝光。

 

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仅供研究使用。不可用于人或动物的治疗或诊断。