创新 - 在我们的RNA中

Ambion® Single Cell-to-CT™ 试剂盒,用于qRT-PCR

  • 单细胞分析的最高灵敏度
  • 完整的试剂盒,方便且易执行的试验方案

此新型试剂盒提供了一套已经过验证的基因表达分析工作流程,及适用于单细胞研究的标准化平台。 查看常见问题.

用于qRT-PCR的Ambion® 单 Cell-to-CT™ 试剂盒


采用Ambion® Single Cell-to-CT™试剂盒可在单细胞水平上进行基因表达研究,无需先提取RNA。 试剂盒具有最高的灵敏度,即便是以单细胞为原料,亦可获得可靠且一致的结果。 此新型试剂盒提供了一套已经过验证的基因表达分析工作流程,及适用于单细胞研究的标准化平台。

为什么要研究单个细胞?

由于组织是由细胞组成的异质结构,因此基于同质群体的基因表达检测无法说明个体细胞中的微小变化,而只能检测较明显的改变。

单细胞分析是诸多应用领域的关键,如候选药物筛选、细胞分化和干细胞研究及细胞对特定刺激的应答检测。

使用标准化平台 (如Ambion® Single Cell-to-CT™试剂盒) 从单细胞中获得的结果,可在整个研究界中保持一致。 这将加快基于单细胞的应用,如有限的临床样本或其它珍贵样本中的生物标志物评估。

单细胞基因表达分析技术应用

罕见细胞或事件

  • 循环肿瘤细胞
  • 母体血液中的胎儿细胞
  • 文库中事件
稀有、珍贵的样本

  • 档案组织
  • 临床样本(新鲜肿瘤)
  • 生物标志物发现
在种群中的单细胞精度

  • 候选药物筛选
  • 细胞分化(例如:干细胞)
  • 随机刺激反应

常见问题

  1. 我是否可以使用单个 Cell-to-CT™试剂盒检测miRNA?
  2. 试剂盒中试剂是否可以承受冻融循环?
  3. 对于单细胞分析,是否需要对我的数据进行标准化处理?
  4. 样品是否需要立即冻存?
  5. 评价GC富集基因表达效果时有什么需要特别注意的吗?
  6. 我们是否使用Cells进行过植物组织静态试验?
  7. 我们是否可以细胞及CT试剂盒运行多重反应?
  8. 当使用Single Cell-to-CT ™试剂盒时,gDNA污染是一个问题吗?

解答

1). 我是否可以使用单个 Cell-to-CT™试剂盒检测miRNA?

是的,使用修饰后的Megaplex™库用于MicroRNA表达分析实验方案 (P/N 4399721 Rev. B)。 在此实验方案中,调整逆转录和预扩增反应,以包括所有细胞裂解物。


2). 试剂盒中的试剂可以反复冻融吗?

我们测试了经过五至十次冻融的试剂,结果显示其对Ct 值无影响。 裂解样本反复冻融达五次对基因表达数据无显著作用。


3). 对于单细胞分析,是否需要对我的数据进行标准化处理?


由于单细胞的生物学差异和转录噪声,我们不推荐采用内源性对照进行标准化。 由于上述差异,标准化实际上增加了单细胞中表达水平的计算范围。


4). 样品是否需要立即冻存?

样本裂解后可在室温下放置达30分钟,加入终止液后可放置达2小时。 细胞裂解物、cDNA和预扩增样品均可冷冻保存用于以后处理

 

5). 评价GC富集基因表达效果时有什么需要特别注意的吗?

不关注富含GC的基因。

 

6). 我们是否使用Cells进行过植物组织静态试验?

我们尚未将其用于植物组织内部。 When working with plants, we suggest employing one of the following standard homogenization methods; (1) motorized homogenizer (2) stainless steel bead beating (3) liquid nitrogen-mortar/pestle.

 

7). 我们是否可以细胞及CT试剂盒运行多重反应?

是。Ct试剂盒的细胞可用于多重qRT-PCR分析。 如果要测试大量的靶标,我们建议结合Taq Man®检测法来使用。

 

8). 当使用Single Cell-to-CT ™试剂盒时,gDNA污染是一个问题吗?

Cells-to-CT™技术是一种独特的裂解培养细胞的方法,同时可去除基因组DNA (gDNA) 并保护RNA的完整性。 因此,在实验方案中加入裂解/DNA酶处理步骤后,qRT-PCR中便不存在gDNA污染。

 

与竞争产品相比,Cells-to-CT™ 试剂盒对gDNA的去除更干净

 

10,000 参照制造商提供的说明书制备HeLa细胞,采用 (+RT) 或不采用 (-RT) 逆转录酶进行逆转录。 使用实时PCR方法检测每个样品中的PPIA表达水平。 从–RT CT值中减去由此产生的+RT CT值,获得∆CT。

 

与煮沸相比,Cells-to-CT可更灵敏,更有效地去除gDNA

 


将8个生物学意义的10 HeLa细胞重复置于384孔光学反应板内,每孔采用一种制备方法。 进行单独的预扩增反应——利用RT反应测定18S中的DNA污染。 Cells-to-CT™试剂去除多余的gDNA的效果可比煮沸更显著。