Platinum-SuperFi   Invitrogen™ Platinum™ SuperFi™ DNA聚合酶是一款具备校正功能的DNA聚合酶,兼具卓越的保真度与备受好评的Platinum热启动技术,专为提高PCR成功率而设计。Platinum SuperFi DNA聚合酶的保真度超过Taq酶100倍以上,非常适合克隆、突变及其他需要极高序列准确度的应用。
  • 保真度超过Taq酶100倍以上
  • 采用Platinum热启动技术实现更高特异性和更高产量
  • 针对纯化不佳或GC含量大于65%等难扩增样本实现高效扩增
  • 便捷的工作流程,可实现室温组装反应,使用绿色缓冲液可直接进行凝胶上样

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科学家评价:

Platinum SuperFi DNA聚合酶——多种应用的理想之选

  • 高保真PCR
  • 克隆与亚克隆
  • 定点突变
  • 富含GC模板的扩增
  • 测序模板制备


  • 高通量PCR
  • 扩增纯度不佳的样本
  • 长片段PCR(长达20kb)
  • 快速PCR

优势

Platinum SuperFi DNA聚合酶以极低的错配率确保DNA序列的准确度,提供了极佳的实验结果可信度.采用二代测序技术测定Platinum SuperFi DNA聚合酶与同类DNA聚合酶的相对保真度值。计算结果表明,Platinum SuperFi DNA聚合酶的相对保真度值达到Taq DNA聚合酶的100倍以上。

Platinum SuperFi DNA Polymerase

不同DNA聚合酶的相对保真度值。 通过二代测序技术测量聚合酶的保真度。实验误差的背景水平采用PCR-free文库测序数据来评估。由于高保真酶的错配率极低,很难量化统计学上的显著差异,不过测试反应均平行进行,并最终以Taq聚合酶为基准对保真度进行归一化处理。

凭借强大的酶促能力和卓越的热启动技术,Platinum SuperFi DNA聚合酶可为各类序列组成和扩增片段长度提供高特异性和高产量扩增。Platinum热启动技术基于专利抗体来抑制酶活性,直到初始PCR变性步骤开始,从而避免非特异性的扩增和引物的降解。热启动PCR可方便地在室温下进行PCR实验系统组装,靶标扩增片段产量更高。

Platinum SuperFi DNA

Platinum SuperFi DNA Polymerase可实现更高特异性和更高产量。从50 ng人gDNA中扩增7个片段,片段长度为500至800 bp,GC含量各异(500-800 bp)。70%与76% GC含量的片段反应中加入了SuperFi™ GC增强剂。所用的分子量标准品为Thermo Scientific™ ZipRuler™ Express DNA ladder 2。

广泛适用于不同长度片段的扩增。Platinum SuperFi DNA聚合酶(最左侧图)可为不同长度(0.2-20 kb)的人类基因组DNA片段提供高特异性与高产量扩增.使用竞争品牌的DNA聚合酶(A—KAPA HiFii™ HotStart PCR试剂盒,B—KOD Hot Start,C—PrimeSTARi™ GXL和D—PfuUltra™ II Fusion Hot Start)对相同靶点进行了扩增。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder 2。

高度灵敏的Platinum SuperFi DNA聚合酶能够使低丰度的DNA模板检测获得精确的结果,非常适合靶标DNA起始样本有限或样本中靶标DNA浓度较低的实验。

Platinum SuperFi DNA Polymerase

以少量DNA起始样本获得高灵敏度和可靠的扩增结果。使用Platinum SuperFi DNA聚合酶及竞争品牌的DNA聚合酶(A—KOD Hot Start,B—PfuUltra II Fusion Hot Start,C—KAPA HiFi HotStart PCR Kit,D—HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit,E—Herculase™II Fusion,F—Expand™High FidelityPLUS PCR System和G—Advantage™HD Polymerase Mix)以50 μL PCR反应体系从0.4 ng、2 ng、10 ng、50 ng和250 ng人类基因组DNA中扩增2 kb片段。每0.4 ng人类基因组DNA中的基因拷贝数在100份左右。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder 2。

 

 

所有的Platinum SuperFi™ DNA聚合酶产品均附带一管独立的SuperFi™ GC增强剂,后者能够特异性地扩增高GC含量靶标并有效提升其产量。

更佳的富含GC靶标扩增效果。Platinum SuperFi DNA聚合酶能够针对不同的富含GC靶标提供高扩增特异性和高产量(顶图和底图,最左侧图)。灰色三角表明所扩增DNA片段(66%,69%,73%与76%)中不断增加的GC含量(%)。我们也使用竞争品牌的DNA聚合酶,按照生产商推荐的富含GC的PCR实验方案对相同的扩增片段进行了扩增(A—KAPA HiFi HotStart PCR Kit,B—Q5™ Hot Start High-Fidelity,C—Pwo™ SuperYield,D— KOD Hot Start,E—PrimeSTAR GXL和F—PfuUltra II Fusion Hot Start)。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder 2。

Platinum SuperFi DNA聚合酶带有一个DNA结合区域,用于提高持续合成能力以及对常规PCR抑制剂(如肝素、木聚糖和腐植酸)的耐受性。

抑制剂耐受。使用Platinum SuperFi DNA聚合酶或竞争品牌的高保真DNA聚合酶(A—Q5 Hot Start High-Fidelity,B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit,C—KOD Hot Start和D—PrimeSTAR GXL)扩增2 kb的人类基因组DNA片段,反应混合物分别包含1-无抑制剂,2-肝素(0.15 µg/µl),3-木聚糖(0.5 µg/µl)或4-腐植酸(0.5 ng/µl)。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder2。

由于持续合成能力高、错配率极低,Platinum SuperFi DNA聚合酶非常适合高产量和高特异性地精准扩增长片段(长达20 kb)。实验操作方案还提供了扩增长度超过10 kb片段时的推荐PCR循环条件。 更长片段(长达40 kb)也可扩增,不过可能需要额外优化反应条件和引物设计。

扩增长片段。Platinum SuperFi DNA聚合酶(P泳道)成功地扩增了15 kb和30 kb的人类基因组DNA(gDNA)靶标序列(50 ng DNA溶于50μL PCR反应体系)。使用专为扩增长片段靶标而设计的相同引物组对竞争品牌的DNA聚合酶进行测试(A—Q5 Hot Start High-Fidelity,B—KAPA HiFi HotStart PCR试剂盒,C—KOD Hot Start,D—PrimeSTAR GXL和E—PfuUltra II Fusion HotStart)。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder2。

Platinum SuperFi DNA聚合酶在室温下稳定性更好,有助于实现高通量应用。

Bench-top stability

Platinum SuperFi DNA聚合酶在室温下的稳定性。载入热循环仪之前,于室温条件下分别配制和孵育PCR反应体系0和24小时。即使是经过24小时的室温孵育,拥有优异热启动技术的Platinum SuperFi DNA聚合酶仍能够为用户提供高反应特异性和高产量。使用Platinum SuperFi DNA聚合酶(P泳道)和竞争品牌的DNA聚合酶(A—Q5 Hot Start High-Fidelity,B—PrimeSTAR HS,C—KAPA HiFi HotStart PCR Kit和D—KOD Hot Start)扩增501 bp人类基因组DNA片段(50 ng DNA溶于 50 μL PCR反应体系)。所用的分子量标准品为ZipRuler Express DNA ladder 2。

Platinum SuperFi DNA聚合酶产品附带绿色缓冲液,可方便地对PCR产物直接凝胶上样。绿色缓冲液中含有一种密度试剂和两种示踪染料,无需凝胶上样前繁琐的染料添加步骤。绿色缓冲液还与DNA测序、连接与限制性酶切等下游应用相兼容。

简化PCR流程。绿色缓冲液能对PCR产物直接凝胶上样,免去了繁琐的染料添加步骤。凝胶图像中的左侧泳道显示了电泳前含有绿色缓冲液的反应混合物。凝胶的右侧泳道显示出黄色和蓝色染料分别经过5分钟和15分钟电泳过程后的迁移情况。

 

 


常见问题

当您使用Platinum SuperFi DNA聚合酶进行PCR扩增时,最佳的引物退火温度可能会与Taq聚合酶显著不同。务必使用 Tm值计算器(thermofisher.com/tmcalculator)来确定引物的Tm值及推荐的退火温度。.

SuperFi GC增强剂专为提升GC含量超过65%的序列扩增效果而设计。我们推荐在最终反应体系中添加20%浓度的SuperFi GC增强剂。详细的说明可参见产品手册。

是的,SuperFi™缓冲液(货号12355-005,4 x 1.25 mL)和SuperFi™Green缓冲液(货号12356-005,4 x 1.25 mL)均有单品销售。

良好的实验室规范对于长片段扩增至关重要。这些重要因素包括高质量的模板(纯净、新鲜且完整)和新配制的引物溶液。可考虑的优化步骤包括实验方案中推荐的降低退火和延伸温度、延长延伸时间以及增加模板用量。

 

Platinum SuperFi DNA聚合酶无法读取DNA模板中的dUTP衍生物或dITP,因此我们不推荐使用这些类似物。Platinum SuperFi DNA聚合酶能够整合7-deaza-dGTP和放射性标记的dNTP。

Platinum SuperFi DNA聚合酶绿色预混液的示踪染料,Platinum SuperFi DNA聚合酶单酶产品的绿色PCR缓冲液中的示踪染料都是由蓝色和黄色染料组成,未检测到它们对于PCR效能或酶活性明显影响。

Platinum SuperFi DNA聚合酶绿色预混液的示踪染料,Platinum SuperFi DNA聚合酶单酶产品的绿色PCR缓冲液中的示踪染料都是由蓝色和黄色染料组成,都能够与自动化荧光DNA测序、连接和限制性酶切等下游应用相兼容。对于通过光谱吸收或荧光激发来分析PCR产物的下游应用而言,我们推荐使用本产品的无色版本(Platinum SuperFi DNA聚合酶或Platinum SuperFi PCR预混液),或在分析前对PCR产物进行优化。

不会,示踪染料(分别为蓝色和黄色染料)不会干扰胶纯化试剂盒对DNA片段的纯化效果。

Platinum SuperFi DNA聚合酶生成的是平端的PCR产物,可直接克隆至平端克隆载体中。如果PCR反应后对产物添加3'端 dA突出,则可进行TA克隆操作。请于加突出之前纯化Platinum SuperFi DNA聚合酶的PCR产物。添加3’dA-突出(TA克隆)的操作包括如下步骤:

1) 纯化PCR产物(如使用PCR纯化试剂盒或苯酚抽提和DNA沉淀法)。添加突出之前,PCR产物必需经过纯化,否则残留的Platinum SuperFi DNA聚合酶所带的强校准活性会降解新添加的3'dA-突出。

2) 使用Taq DNA聚合酶来添加3'dA。

反应体系成份:

  • 纯化的PCR产物
  • 0.2 mM dATP
  • 1x Taq 缓冲液
  • 1 U Taq DNA聚合酶
  • 在72°C条件下孵育反应体系20分钟。

3) 进行TA克隆操作。为了获得最佳的连接效率,我们推荐使用最新合成的PCR产物,因为3'dA突出在长期储存过程中可能会发生丢失


资源

产品手册

支持

Tm 值计算器
Platinum SuperFi DNA聚合酶的退火温度标准与其他常见DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)不同。请使用我们网站上提供的 Tm值计算器,以获得最佳结果。

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除非特别声明,本文提及全部商标的所有权均隶属于Thermo Fisher Scientific及其附属机构。Q5为New England BioLabs公司的注册商标。Pwo与Expand为Roche Molecular System公司的注册商标。PfuUltra和Herculase是Agilent公司的注册商标。KAPA HiFi HotStart为KAPA Biosystems公司的商标。HotStar HiFidelity为Qiagen公司的注册商标。PrimeSTAR和Advantage是Takara- Clontech Laboratories公司的注册商标。