Power Up™ SYBR Green 预混液

适用于所有qPCR仪器的通用型预混液

PowerUp™ SYBR™ Green 预混液的特性包括:

  • 双重热启动机制提供了出众的特异性
  • 在较宽的动态范围内都能获得可重复性的 Ct
  • 适用于标准或快速循环,<50分钟内即可获得结果
  • 采用 UN G和 dUT P配方,可防止残留 PCR 产物污染
  • 制备好qPCR反应板后,可以在室温下稳定保存72小时
  • 兼容多种仪器
为最大限度保证特异性和可重复性而配制

PowerUp™ SYBR Green 预混液含有我们专利的 Dual-Lock™ Taq DNA 聚合酶,后者结合了两种热启动机制来控制自身的活性。这种双重热启动途径可以对 Taq 的活化进行严格的控制,有助于防止聚合酶在低温下出现不需要的过早活化,从而避免非特异性扩增。Dual-Lock™ Taq 配制成了方便的2X预混液形式,其中含有一套经优化的缓冲体系、专利的添加剂以及除垢剂成分,可以进一步提升PowerUp™ SYBR Green预混液的特异性。 

在采用PowerUp™ SYBR Green预混液评估24种不同的引物组时,无需进行引物优化或重新设计引物,即可通过100%反应获得单一熔解曲线。相反,在采用几家竞争厂商的预混液时,在分析一些相同的靶标时,出现了非特异性扩增,如图所示,熔解曲线之中出现了多个峰(图1)。SYBR反应的特异性验证是保证数据质量和有效性(Bustin et al; 2009)的必要步骤。PowerUp™ SYBR Green预混液具有高度特异性,使您可以缩减为获得优质数据而投入在优化和重新设计引物方面的时间和经费。

可重复性是衡量实时定量PCR数据质量的另一指标,而可重复性经常会在低模板浓度时出现下降,而这又会加剧影响数据波动。但在采用一系列检测靶标进行测试时,采用双重热启动 Taq DNA 聚合酶的PowerUp™ SYBR Green预混液在较宽的动态范围内展现出了良好的可重复性(图2)。其良好的可重复性使您在分析低丰度转录本和较小的倍数变化时,获得更具意义的结果。  

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图1: 在QuantStudio 7仪器上采用5种不同的预混液对3种靶标进行熔解曲线分析。我们针对每种预混液采用了厂商推荐的反应条件,分别选用了6 个对数级稀释倍比的人通用参照cDNA进行分析.
竞争厂商B: BioRad (SsoAdvanced™Universal SYBR Green Supermix); 竞争厂商R: Roche (LightCycler 480 SYBR Green I Master); 竞争厂商QB: Quanta Bioscenices (PerfeCTA SYBR Green SuperMix ); 竞争厂商Q: Qiagen (QuantiTect SYBR Green PCR Kit).

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图2: 在7900仪器上,选取300 nM的两批PowerUp™ SYBR预混液进行了24次四重。绘制相对于平均C t的C t标准偏差。平均C t>34的情况被本次分析排除在外。
可在较宽的动态范围内获得可靠的结果

PowerUp™ SYBR Green预混液可使100 ng - 0.1 pg cDNA/次反应的实验获得稳定、可靠的结果。1 能在较宽的动态范围内获得一致的扩增,是qPCR方法及使用ΔΔCt 方法进行基因表达分析的基本前提。与其他竞争产品不同,在动态范围实验中,PowerUp™ SYBR Green预混液未在高cDNA起始量、低相关系数下出现抑制现象,在6个对数级的起始样品量下均维持了稳定的效率,最大限度确保了数据质量的可信度(图3,表1)。

Power Up™ SYBR Green 预混液

1动态范围与实验和模板浓缩物及预混液的有关,因此单次结果可能会存在差异。

图 3:PowerUp™ SYBR Green预混液在较宽的动态范围内表现出了可靠的性能我们分别选用6个对数级稀释的人通用参照cDNA,获得了PGK1基因的扩增曲线。反应在 QuantStudio 7 仪器上依照制造商推荐的实验流程分三次进行。竞争厂商的预混液表现出了更高的抑制性,具体证据在曲线形状中可以看出,最高cDNA起始量时的稀释点间的间距较小。此外,还有几家竞争厂商的预混液无法在最低稀释点检测到可靠的结果。

竞争厂商 B1:BioRad (SsoAdvanced™Universal SYBR Green Supermix);竞争厂商 B2:SsoFast™ EvaGreen SuperMix;竞争厂商 R:Roche (LightCycler 480 SYBR Green I Master); 竞争厂商 QB:Quanta Bioscenices (PerfeCTA SYBR Green SuperMix ); 竞争厂商 Q:Qiagen(QuantiTect SYBR Green PCR 试剂盒)

试剂 GAPDH ABCC2 ARL1 PGK1
PowerUp™ SYBR Master Mix 5 5 4 6
竞争厂商 B1 5 3 4 4
竞争厂商 B2 5 3 4 4
竞争厂商 R 5 3 2 4
竞争厂商 QB 5 4 4 4
竞争厂商 Q 5 3 3 4

表 1.竞争厂商的预混液的4项检测的动态范围比较。表中的数字表示10倍稀释的线性范围,此项指标根据每一种预混液的各个靶标测得。例如,6表示跨越了7次10倍稀释的范围,在10uL的反应体系中cDNA的浓度从100ng稀释到了0.1pg。

1动态范围与实验和模板浓缩物及预混液的有关,因此单次结果可能会存在差异。

图 3:PowerUp™ SYBR Green预混液在较宽的动态范围内表现出了可靠的性能我们分别选用6个对数级稀释的人通用参照cDNA,获得了PGK1基因的扩增曲线。反应在 QuantStudio 7 仪器上依照制造商推荐的实验流程分三次进行。竞争厂商的预混液表现出了更高的抑制性,具体证据在曲线形状中可以看出,最高cDNA起始量时的稀释点间的间距较小。此外,还有几家竞争厂商的预混液无法在最低稀释点检测到可靠的结果。
竞争厂商 B1:BioRad (SsoAdvanced™Universal SYBR Green Supermix);竞争厂商 B2:SsoFast™ EvaGreen SuperMix;竞争厂商 R:Roche (LightCycler 480 SYBR Green I Master); 竞争厂商 QB:Quanta Bioscenices (PerfeCTA SYBR Green SuperMix ); 竞争厂商 Q:Qiagen(QuantiTect SYBR Green PCR 试剂盒)

试剂 GAPDH ABCC2 ARL1 PGK1
PowerUp™ SYBR预混液 5 5 4 6
竞争厂商B1 5 3 4 4
竞争厂商B2 5 3 4 4
竞争厂商R 5 3 2 4
竞争厂商QB 5 4 4 4
竞争厂商Q 5 3 3 4

表1. 竞争厂商的预混液的4项检测的动态范围比较。表中的数字表示10倍稀释的线性范围,此项指标根据每一种预混液的各个靶标测得。例如,6表示跨越了7次10倍稀释的范围,在10uL的反应体系中cDNA的浓度从100ng稀释到了0.1pg.

兼容多种仪器

PowerUp™ SYBR Green 预混液可在标准及快速 PCR 模式下使用,其兼容所有 Applied Biosystems 实时荧光定量 PCR 仪器。2 此外,还可兼容 Bio-Rad IQ™5、Roche LightCycler 480 和 Agilent Mx3005P 系统。为确保获得最佳的结果,建议的引物浓度应介于 300–800 nM 之间

2 为确保最佳的实验性能,建议采用仅适用于 Applied Biosystems 7900 系统的标准反应条件。

用于遗留污染控制的尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)

在实验室中,操作常规PCR时所存在的污染是令很多研究者头疼的问题,同时也是假阳性结果的一大重要来源。PowerUp™ SYBR Green预混液含有UNG和dUTP,能够降解任何之前扩增的PCR产物,以免其污染之后的qPCR反应。PowerUp™ SYBR Green预混液使用热不稳定性的UNG酶,能够有效地控制污染物,同时又不影响后续的PCR产物下游分析,如熔解曲线或凝胶分析。

持续72小时的预混反应稳定性

在至多72小时内,PowerUp™ SYBR Green 预混液及其 Dual-Lock™ TaqDNA 聚合酶表现出了一致的预混反应性能(表2)。此预混液的稳定性使得用户可以在进行 PCR 反应之前灵活地设置孔板,而不对实验结果造成影响。3

3Pre-PCR稳定性不仅受到预混液影响,还受到分析的靶标影响。为确保最佳的可信度,研究人员应验证自身具体靶标的稳定性曲线。

靶标 T-0 hr T-72 hr ∆Ct
ADAM10 25.2 25.6 0.4
APOA1 24.9 24.9 0.0
CCNB1 26.0 26.1 0.1
COL1A1 23.9 23.9 0.1
CTGF 24.3 24.7 0.3
METTL3 26.3 26.7 0.3
靶标 T-0 hr T-72 hr ∆Ct
ADAM10 25.2 25.6 0.4
APOA1 24.9 24.9 0.0
CCNB1 26.0 26.1 0.1
COL1A1 23.9 23.9 0.1
CTGF 24.3 24.7 0.3
METTL3 26.3 26.7 0.3

表 2.PCR 预混物的稳定性。使用 PowerUp™ SYBR Green 预混液在 StepOnePlus™ 实时定量 PCR 系统上从 1ng 人 cDNA 中扩增几种靶标,分别选择反应设置后立即扩增或室温避光 72 小时后扩增。在 0 小时和 72 小时两个时间点都可以得到单一熔解曲线.

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