iBind Flex Western Device

灵活的规格,只需更少的一抗用量,重复性更好的结果

Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统采用灵活的印迹处理方法,可助您显著缩短操作时间,检测不同规格的印迹膜,并轻松优化抗体用量。该系统利用 顺序侧流技术, (毛细管作用的一种简单形式),可自动化完成Western Blot实验中所有的抗体孵育和洗涤步骤,您只需将一抗、二抗溶液和洗涤缓冲液加入到设备中,设备即可自动进行相关操作。在3小时内,就能得到可立即用于最终检测的印迹膜。iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统在带来灵活的解决方案的同时,也兼顾了自动化的便捷性。

  • 灵活性—可处理1张中型印迹膜、2张微型印迹膜或6张垂直剪切膜条,并可在一次实验的不同膜上采用不同的抗体
  • 兼容性—可使用硝酸纤维素膜或PVDF膜,可用直接标记的一抗或二抗进行检测(AP、HRP或荧光标记)
  • 节约成本—用于蛋白质免疫印迹时,比传统孵育方式最多可节省80%的一抗

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灵活的规格

iBind Flex系统具有可自行更换的加液插槽,能够处理多种规格的膜,甚至可在一台设备中同时孵育不同的一抗和二抗。

ibind-flex-midi

中型印迹膜

使用相同的抗体条件

ibind-flex-mini

微型印迹膜

使用相同或不同的抗体条件

ibind-flex-strips

垂直剪切膜条

使用相同或不同的抗体条件

与手动处理的蛋白质免疫印迹相比,能获得同样甚至更好的结果

对比手动处理和iBind Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Invitrogen™ NuPAGE™ 4-12%、20孔凝胶在MOPS SDS电泳缓冲液中分离含有GST标签重组蛋白的样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。使用相同浓度的同一个一抗和二抗对印迹膜进行检测。一抗为兔抗GST抗体,按1:500稀释(用于iBind系统时,将8 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将40 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。二抗为山羊抗兔HRP抗体,按1:600稀释(用于iBind系统时,将6.7 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将33.3 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。最终检测时,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统拍照。

泳道 1-5: IKK beta (80 ng, 40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng)
泳道 6-10: DDR2 (120 ng, 60 ng, 30 ng, 15 ng, 7.5 ng)
泳道 11-15: FLT1 (40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng)
泳道 16-20: HCK (360 ng, 180 ng, 90 ng, 45 ng, 22.5 ng)

只需更少的一抗,就能获得更好的蛋白质免疫印迹结果。对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。每块凝胶具有10个泳道,样本为2倍梯度稀释的293细胞提取物(30 µg-0.06 µg)。使用下述条件进行抗体孵育和洗涤后,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统显色。

  • MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗体,按1:1000 稀释(用于iBind系统:将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中,用于手动孵育盒操作时,将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中)。
  • Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗体,按1:1000 稀释(用于iBind系统:将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中,用于手动孵育盒操作时,将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中)。
  • 二抗:山羊抗兔IgG,使用iBind系统,按1:600稀释(3.33 µL抗体溶于2mL iBind溶液中),用于手动孵育盒操作时,按1:1800稀释(将5.55 µL抗体溶于10mL iBind溶液中)。

使用垂直剪切膜条和荧光检测都获得了出众的蛋白质免疫印迹结果。 对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统处理的印迹膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上,将每张印迹膜剪切成3泳道膜条。最后,使用Odyssey™ CLx仪器 (LI-COR™ Inc)进行成像。

样本和泳道如下所示:

  • 泳道 1:  Thermo Scientific™ PageRuler™预染NIR蛋白分子量标记(3 µL)
  • 膜条 1:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)和Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
  • 膜条 2:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
  • 膜条 3:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)
  • 膜条 4:  Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
  • 膜条 5:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
  • 膜条 6:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)

检测和抗体使用浓度如下:

膜条编号 一抗 一抗用量 手动处理 一抗用量 iBind Flex 二抗 二抗用量 手动处理 二抗用量 iBind Flex
1 磷酸化Akt(红)
磷酸化Elk-1(绿)
1:2000
1:1000
1:400
1:200
IRDye 680LT
IRDye 800CW
1:20,000
1:15,000
1:4000
1:3000
2 SRC(红)
β-Catenin(绿)
1:250
1:1000
1:50
1:200
IRDye 680LT
IRDye 800CW  
1:20,000
1:15,000
1:4000
1:3000
3 磷酸化Akt 1:2000 1:400 IRDye 680LT 1:20,000 1:4000
4 磷酸化Elk-1 1:1000 1:200 IRDye 800CW 1:15,000 1:3000
5 SRC 1:250 1:50 IRDye 680LT 1:20,000 1:4000
6 beta Catenin 1:250 1:200 IRDye 800CW 1:15,000 1:3000

蛋白质免疫印迹处理完毕后,使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。

对比手动处理和iBind Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Invitrogen™ NuPAGE™ 4-12%、20孔凝胶在MOPS SDS电泳缓冲液中分离含有GST标签重组蛋白的样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。使用相同浓度的同一个一抗和二抗对印迹膜进行检测。一抗为兔抗GST抗体,按1:500稀释(用于iBind系统时,将8 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将40 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。二抗为山羊抗兔HRP抗体,按1:600稀释(用于iBind系统时,将6.7 µL抗体溶于4 mL iBind Flex溶液;用于手动孵育盒操作时,将33.3 µL抗体溶于20 mL iBind Flex溶液)。最终检测时,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统拍照。

泳道 1-5: IKK beta (80 ng, 40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng)
泳道 6-10: DDR2 (120 ng, 60 ng, 30 ng, 15 ng, 7.5 ng)
泳道 11-15: FLT1 (40 ng, 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng)
泳道 16-20: HCK (360 ng, 180 ng, 90 ng, 45 ng, 22.5 ng)

只需更少的一抗,就能获得更好的蛋白质免疫印迹结果。对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex系统处理的蛋白质免疫印迹。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上。每块凝胶具有10个泳道,样本为2倍梯度稀释的293细胞提取物(30 µg-0.06 µg)。使用下述条件进行抗体孵育和洗涤后,将印迹膜浸在Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura底物中孵育5分钟,并使用成像系统显色。

  • MEK2 (45 kDa)——兔抗MEK2抗体,按1:1000 稀释(用于iBind系统:将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中,用于手动孵育盒操作时,将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中)。
  • Securin(428 kDa)——兔抗Securin抗体,按1:1000 稀释(用于iBind系统:将2µL抗体溶于2mL iBind溶液中,用于手动孵育盒操作时,将10µL抗体溶于10mL 缓冲液中)。
  • 二抗:山羊抗兔IgG,使用iBind系统,按1:600稀释(3.33 µL抗体溶于2mL iBind溶液中),用于手动孵育盒操作时,按1:1800稀释(将5.55 µL抗体溶于10mL iBind溶液中)。

使用垂直剪切膜条和荧光检测都获得了出众的蛋白质免疫印迹结果。 对比手动处理(在孵育盒中进行孵育和洗涤步骤)和Invitrogen™ iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统处理的印迹膜。使用Bolt™ 4-12%、10孔凝胶和MES SDS电泳缓冲液分离样本,随后,使用iBlot™ 2干转系统转印至硝酸纤维素膜上,将每张印迹膜剪切成3泳道膜条。最后,使用Odyssey™ CLx仪器 (LI-COR™ Inc)进行成像。

样本和泳道如下所示:

  • 泳道 1:  Thermo Scientific™ PageRuler™预染NIR蛋白分子量标记(3 µL)
  • 膜条 1:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)和Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
  • 膜条 2:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
  • 膜条 3:  磷酸化Akt提取物(15 µg、7.5 µg、3.75 µg)
  • 膜条 4:  Elk-1融合蛋白(150 ng、75 ng、37.5 ng)
  • 膜条 5:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)
  • 膜条 6:  HeLa细胞提取物(30 µg、15 µg、7.5 µg)

检测和抗体使用浓度如下:

膜条编号 一抗 一抗用量 手动处理 一抗用量 iBind Flex 二抗 二抗用量 手动处理 二抗用量 iBind Flex
1 磷酸化Akt(红)
磷酸化Elk-1(绿)
1:2000
1:1000
1:400
1:200
IRDye 680LT
IRDye 800CW
1:20,000
1:15,000
1:4000
1:3000
2 SRC(红)
β-Catenin(绿)
1:250
1:1000
1:50
1:200
IRDye 680LT
IRDye 800CW  
1:20,000
1:15,000
1:4000
1:3000
3 磷酸化Akt 1:2000 1:400 IRDye 680LT 1:20,000 1:4000
4 磷酸化Elk-1 1:1000 1:200 IRDye 800CW 1:15,000 1:3000
5 SRC 1:250 1:50 IRDye 680LT 1:20,000 1:4000
6 beta Catenin 1:250 1:200 IRDye 800CW 1:15,000 1:3000

蛋白质免疫印迹处理完毕后,使用Odyssey CLx仪器进行印迹膜成像。

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开始使用更简单、更优雅的蛋白质免疫印迹处理。iBind™ Flex起始套装包括iBind Flex蛋白质免疫印迹处理系统、iBind™ Flex卡片和溶液试剂盒,方便您立即开始您的实验:

  • iBind™ Flex蛋白质免疫印迹处理系统
  • iBind™ Flex卡片(1盒10张)
  • iBind™ Flex溶液试剂盒(备注:荧光检测需要荧光检测(FD) 溶液试剂盒)

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