Thermo Scientific™ SuperSignal™化学发光HRP底物可为免疫印迹分析应用提供出色的性能,相对于其他荧光检测系统,具有更持久的光发射时间和更高的信号强度。

特性

  • ECL—增强的辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
  • 出色的灵敏度—可以检测从低皮克级别到中低飞克级别的靶标蛋白
  • 信号强烈—可曝光到胶片或成像系统上轻松捕获
  • 出色的信号持久度—理想状况下能够提供6 – 24时的有效光输出
  • 试剂稳定—试剂盒组分在4°C下可稳定保存1年,在室温下可稳定保存6个月
  • 有助于节省抗体—最适合高度稀释的抗体

蛋白劲促低至3折

哪种SuperSignal试剂盒最适合您?

 
  SuperSignal West
Pico PLUS
SuperSignal West
Dura
SuperSignal West
Femto
主要优点 相对于其它ECL竞争产品,信号更好,价格更低 最适于成像设备使用 HRP检测最灵敏的底物
灵敏度 低皮克级至高飞克级 中飞克级 中低飞克级
灵敏度等级† 3 4 5
信号持久度(小时) 6-24 24 6-8
建议的抗体稀释度 1°: 0.2 -1 μg/mL
2°: 10- 50 ng/mL
1°: 0.02-1 μg/mL
2°: 4-20 ng/mL
1°: 10 -200 ng/mL
2°: 2 - 10 ng/mL
何时选用 靶标丰度较低,样品有限,需要比入门级ECL底物更高的灵敏度 靶标丰度较低,样品有限,需要进行CCD图像捕获 靶标丰度较低,样品稀缺,需要获得最高的灵敏度
为您带来的价值 适于大多数免疫印迹分析;建议用于新靶标检测 最佳的信号持久度 最高的灵敏度
  立即订购 立即订购 立即订购

† 灵敏度等级:1=最低,5=最高

阅读关于各种SuperSignal底物的更多信息

相对于普通的SuperSignal West Pico 底物,Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Pico PLUS化学发光底物具有更高的灵敏度、更长的信号持久度和更高的信号强度。高发射光强度和出色的持久度结合,可以轻松地曝光成像,获得出版级的印迹图像。

SuperSignal West Pico PLUS化学发光底物带来的优势:

  • 皮克至飞克级灵敏度 – 可以检测硝化纤维或PVDF膜上低皮克级至高飞克量级的靶标蛋白
  • 高信号稳定度 – 孵育的印迹可以在关键的4小时时间周期内提供稳定的信号,理想状况下可以提供高达24小时的光输出
  • 出色的稳健度 – 可在推荐的抗体稀释度范围之外提供高性能,包括最常见的1 mg/mL 二抗储液1:5,000 至1:10,000稀释
  • 稳定的试剂 – 工作液8小时内保持稳定;试剂盒室温下1年保持稳定
  • 经济 – 最适合高度稀释的抗体
    • 0.2- 1.0 µg/mL 一抗(1 mg/mL储液1:1,000 至 1:5,000稀释)
    • 10 to 50 ng/mL 二抗(1 mg/mL储液1:20,000 至1:100,000稀释)

SuperSignal West Pico PLUS底物特色产品数据

SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate

化学发光底物产品与SuperSignal West Pico PLUS 底物的比较。使用2倍连续稀释的HEK293或HeLa细胞裂解液检测指定的靶标,起始样品量为亲本指定的量。在和SuperSignal West Pico PLUS 底物或Bio-Rad Clarity底物一起孵育5分钟后,进行化学发光检测和底物比较。其他详情请见产品页面。


Low picogram to high femtogram detection

采用SuperSignal West Pico PLUS 底物进行低皮克至高飞克级检测。在电泳还原性样品稀释液之中稀释Turbo GFP-His-HA-Flag。泳道1含有10 pg 的纯化蛋白,样品按照1:1稀释度配制,按照10 µL/孔添加。电泳之后,将蛋白质转印到硝化纤维膜上,封闭,与1 µg/mL的抗His抗体(货号MA1-21315) 一起孵育,然后再与100 ng/mL的山羊抗小鼠HRP 偶联物(货号32430)  一起孵育。使用SuperSignal West Pico PLUS底物(货号34577)进行检测。在Thermo Scientific™ myECL™ 成像系统(货号62236)上进行30秒的曝光。其他详情请见产品页面。


Robust signal

采用SuperSignal West Pico PLUS 底物获得稳定的信号。使用2倍稀释的HEK293或 HeLa细胞裂解物检测指定的靶标,起始量分别为4 µg/孔或20 µg/孔。SDS-PAGE分离后,采用Pierce Power Blotter(货号22834)和Pierce 1-Step转印缓冲液(货号84731)将蛋白质转印到PVDF(货号 88518)或硝化纤维(货号88018)膜上。采用溶有5%脱脂奶粉的Pierce 20X TBS Tween 20缓冲液(货号28360)封闭膜,与Invitrogen™ 抗β环联蛋白(货号MA1-300)、STAT3(货号MA1-13042) 或WNT1(货号MA5-15544)一起孵育,然后再与20 ng/mL的山羊抗小鼠IgG (H+L)二抗、HRP偶联物(货号 31430)一起孵育。与SuperSignal West Pico PLUS底物一起孵育5分钟后,进行化学发光检测。在加入底物后的指定时间点,在胶片上捕获信号。

Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Dura持久性化学发光底物适用于HRP并进行了优化,可以获得高度灵敏、持久的信号,因而成为CCD摄像机检测系统的首选。和其它信号在30-60分钟内下降至难以检测水平的底物不同,SuperSignal West Dura化学发光底物产生的信号可稳定保持24小时,可以进行多次胶片和摄像机曝光。飞克级灵敏度加24小时发射光,让SuperSignal West Dura底物成为了免疫印迹应用的正确选择,成为了CCD成像系统的最佳伴侣。

SuperSignal West Dura持久性化学发光底物优点:

  • 24小时发射光输出 – 相对于其他HRP增强型化学发光底物,具有更久的稳定发射光输出;可进行多次曝光以获得出版级印迹
  • 高灵敏度 – 可检测低飞克量级的靶标蛋白,可以看到通常难以看到的条带
  • 信号强烈 – 即时信号可通过胶片或兼容的成像系统轻松检测
  • 稳定 – 工作液可保持稳定24小时以上,试剂盒可在室温下1年内保持稳定
  • 更少的抗体用量 – 最适合高度稀释的抗体
    • 20 ng – 1.0 µg/mL一抗(1:15,000 至 1:50,000 稀释的1 mg/mL 储液)
    • 4 - 20 ng/mL二抗(1:50,000至1:250,000稀释的1 mg/mL储液)

SuperSignal West Dura底物特色数据

采用SuperSignal West Dura底物实现更持久的信号。在检测硝化纤维膜上检测HeLa细胞裂解物之中的Hsp86。在样品缓冲液中稀释HeLa细胞裂解物,然后加热到95˚C并持续5分钟。泳道1含有10 μg总蛋白(总计10 μL/孔)。分成4份按照1:1稀释度配制,按照10 µL/孔添加(泳道2-5)。电泳之后,将蛋白质转印到硝化纤维膜(货号88024)上,封闭,采用1:2,000稀释的抗Hsp 86 抗体(货号PA3-013)进行标记,然后再与6.6 ng/mL的山羊抗兔HRP IgG HRP(货号31460) 一起孵育。最后,依照产品说明书,将所得印迹与SuperSignal West Dura底物(货号34076)或Amersham™ ECL™ 引物试剂(GE Healthcare,货号 RPN2232)一起孵育。在底物孵育后的不同时间点,采用CCD成像系统对两组印迹成像。(两组印迹在各个时间点采用相同的曝光参数。)


采用SuperSignal West Dura 底物实现中飞克级检测。在电泳还原性样品稀释液之中稀释GFP-His-HA-FLAG。泳道1含有1,000 fg 的Turbo GFP。样品按照1:1稀释度配制,按照10 µL/孔添加。电泳之后,将蛋白质转印到硝化纤维膜(货号88518)上, 采用SuperBlock T20 (TBS)封闭液(货号37536)封闭。与1 µg/mL的生物素偶联抗His抗体(货号MA1-21315-BTIN) 一起孵育,然后再与1:50,000 稀释的Invitrogen™ 链霉亲和素、HRP偶联物(货号21126)一起孵育。使用SuperSignal West Dura底物(货号34076)进行检测。


采用SuperSignal West Dura 底物实现更出色的灵敏度和信号持久度。在电泳还原性样品稀释液之中稀释A431细胞裂解物。泳道1含有5 µg 的A431裂解物。分成5份按照1:1稀释度配制,按照10 µL/孔添加。电泳之后,使用Pierce Power Blotter (货号22834)和Pierce 1-Step 转印缓冲液(货号84731)将蛋白质转印到硝化纤维膜(货号88018)上。采用含有5%牛奶的TBST缓冲液封闭膜。与0.3 μg/mL的抗β连环蛋白抗体(货号MA1-300) 一起孵育,然后再与5 ng/mL的山羊抗小鼠HRP 偶联物(货号32430) 一起孵育。根据厂商的指导说明,将形成的印迹与SuperSignal West Dura底物(货号34076)、Clarity™ Western ECL 印迹底物 (Bio-Rad Laboratories, Inc.)或Immobilon™ Western 化学发光HRP底物 (EMD Millipore Corp.) 一起孵育。在myECL成像系统(货号62236)上对获得的印迹进行30秒曝光,所用的设置如下:黑色= 65,296,白色 = 65,535,γ = 1.0。

Thermo Scientific™ SuperSignal™ West Femto最高灵敏度底物可用于低飞克级的免疫印迹分析。结合最佳的抗体浓度和封闭液使用时,SuperSignal West Femto底物可以检测到常规的ECL底物无法发觉的超低量靶标蛋白。

SuperSignal West Femto最高灵敏度底物的优势:

  • 高灵敏度 – 搭配适当的一抗和二抗使用时,可以检测出硝化纤维或PVDF膜上低飞克量级的靶标蛋白
  • 可定量 – 生成可跨两个数量级测量的定量信号
  • 信号强烈 – 通过胶片或成像系统曝光,易于捕获
  • 出色的信号持久度 – 优化条件后,可保持8小时的有效光输出
  • 稳定的试剂 – 试剂盒成分在4°C下1年保持稳定,室温下6个月保持稳定
  • 经济 – 最适合高度稀释的抗体
    • 1 ng - 0.2 µg/mL一抗(1:5,000 至 1:100,000 稀释的1 mg/mL 储液)
    • 2 - 10 ng/mL二抗(1:100,000至1:500,000稀释的1 mg/mL储液)

SuperSignal West Femto底物的特色产品数据

采用SuperSignal West Femto 底物实现真正的飞克级检测。将纯化的IκB 依次稀释到100至1 fg,然后在4–20% mini凝胶上进行电泳。将蛋白转印到PVDF膜上,采用StartingBlock 封闭液在室温下封闭1小时。在1:1,000稀释度的兔抗IκBα (1 mg/mL)之中4°C下过夜孵育印迹,之后在1:200,000稀释度的HRP偶联山羊抗兔IgG (1 mg/mL) 抗体之中孵育1小时。在Thermo Scientific™ CL-XPosure™ 胶片上对膜曝光1分钟。


采用SuperSignal West Femto 底物获得最高的灵敏度和信号持久度。在电泳还原性样品稀释液之中稀释NIH3T3裂解液。泳道1含有5 µg 的NIH3T3裂解物。分成5份按照1:1稀释度配制,按照10 µL/孔添加。电泳之后,使用Pierce Power Blotter (货号22834)和Pierce 1-Step 转印缓冲液(货号84731)将蛋白质转印到硝化纤维膜(货号88018)上。采用含有5%牛奶的TBST缓冲液封闭膜。与0.2 μg/mL的抗Erk1抗体(货号MA1-13041) 一起孵育,然后再与5 ng/mL的山羊抗小鼠HRP 偶联物(货号32430) 一起孵育。根据厂商的指导说明,将形成的印迹与SuperSignal West Femto 底物(货号34096)、Clarity™ Western ECL 印迹底物 (Bio-Rad Laboratories, Inc.)、Luminata™ Forte Western HRP底物 (EMD Millipore Corp.)或Immobilon™ Western 化学发光HRP底物 (EMD Millipore Corp.) 一起孵育。在单片CL-XPosure 胶片(8 x 10 in,货号No. 34091)上对获得的印迹进行2分钟曝光。


使用SuperSignal West Femto 底物,用量更少,观察到的结果更多。在5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.15625 µg/孔电泳还原性样品缓冲液中按照10 µL/孔的比例 稀释A431细胞裂解液。电泳后,使用Pierce Power Blotter(货号22834)和Pierce 1-Step转印缓冲液(货号84731)将蛋白质转印到硝化纤维膜(货号88018)上。采用含5%的TBST封闭膜,并切割成三条,以便优化抗体稀释度。按照指示采用抗β-连环蛋白(货号MA1-300)孵育膜,然后再与适当稀释的山羊抗小鼠HRP偶联物(货号31460)一起孵育。采用SuperSignal West Femto底物(货号34095)进行检测。在CL-XPosure胶片,8 x 10 in(货号34091)和myECL成像系统(货号62236)上曝光10秒成像。myECL成像系统的曝光进行了反转和反色处理(黑色=62,000,白色=65,535,γ=1.0)。

有关化学发光免疫印迹检测的更多信息


下载技术要点。

阅读应用说明

 

快速免疫印迹

SuperSignal底物也可通过我们的快速免疫印迹试剂盒(Fast Western Blot kits)提供,相对于普通的化学发光免疫印迹,该方法可节省4小时时间。详细了解快速免疫印迹试剂盒

Thermo Scientific myECL成像系统是一种时尚、功能强大、易用的印迹和凝胶成像仪器,可以通过直观的触摸屏界面和先进的集成软件,进行灵敏的多模式图像捕获和分析。

用于化学发光信号成像的仪器。下表所列的仪器可以捕获各种化学发光底物(例如,Thermo Scientific SuperSignal底物)的成像信号。

供应商 仪器
Thermo Fisher Scientific Thermo Scientific myECL成像系统
Alpha Innotech FluorChem和ChemiImager
Bio-Rad ChemiDocXRS和VersaDoc成像系统, 4000和5000型
UVP Chemi、BioChemi和OptiChemi系统
Kodak Image Station 2000MM
Fotodyne FOTO/Analyst Luminary
Fujifilm LAS-3000成像系统
UVItec Ltd. UVIchemi和UVIprochemi
Syngene G:BOX和GeneGnome型号

Resources

Protein Electrophoresis and Western Blotting Support Center – Find tips, troubleshooting help, and resources for your western workflow.