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The GeneArt® Synechococcus Protein Expression Kit is a second-generation Synechococcus cloning and expression system. Like the first-generation GeneArt® Synechococcus Engineering Kit, this expression system employs the cyanobacterium Synechococcus elongatus strain PCC 7942, but is optimized for high-level expression and offers dual protein tags for detection and/or purification of your gene of interest.

The kit includes frozen cyanobacterial cells, expression vector, OneShot® TOP10 Competent E. coli cells, and easy-to-follow protocols. Our Gibco® BG-11 Media, sold separately, is optimized for the growth and maintenance of select Cyanobacteria including S. elongatus.

  • Express >10% total soluble protein from your gene of interest
  • Detect and purify your protein of interest with 6His TEV and/or V5-His epitope tags
  • Use (optional) seamless assembly to create your constructs
  • Enables reliable results with exceptional strain viability and purity

更好的表达效果,同时可选纯化标签

GeneArt® Synechococcus 蛋白表达试剂盒中的MCS载体是专门设计用于在Synechococcus elongatus中进行基本的强力表达。表达受启动子psbA1、核糖体结合位点(RBS)及可选的起始和终止密码子的控制,具体取决于你要在何处克隆你的基因。该载体的特点包括:

  • 强力的基本启动子(psbA1),可对感兴趣的重组基因进行强力表达
  • 核糖体结合位点(RBS)可提高某些基因的表达
  • 可将你感兴趣的基因靶向整合至S. elongatus基因组中</li> <li>N端有6His TEV附加标记,C端有V5-His附加标记
  • 有大观霉素抗性基因,可用于Synechococcus中进行筛选
  • 灵活的多克隆位点载体

依照制造商推荐的实验方案将β-葡萄糖醛酸酶 (GUS)基因克隆至pSyn_6载体中,并转化至Synechococcus elongatus(GUS活性为阴性)中。使用pSyn_6载体所获得的GUS活性水平相比第一代GeneArt® 藻类基因工程系统(pSyn_1)所观察到的要高出100倍。

依照制造商推荐的实验方案将β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因克隆至pSyn_6载体中,并转化至Synechococcus elongatus(GUS活性为阴性)中。使用western 印迹分析对GUS表达水平进行检测,其结果显示GUS在总可溶性蛋白中占有>20% 。TSP=总可溶性蛋白。

 

 

 

 

 

 

整合效率超过80%

Synechococcus elongatus PCC 7942的转化依赖于细胞染色体与外源DNA间的同源重组,外源DNA无法独立进行复制,并含有与染色体同源的序列。整合至染色体的位点(中性位点,NS1)可作为克隆座(Clerico et al., 2007),因为该位点可在不引起任何异常性状的情况下发生断裂,从而允许对异位序列进行重组。当使用含抗生素抗性组件和中性位点序列的载体进行转化实验时,在载体中性位点及S. elongatus染色体之间会发生双重同源重组。筛选标签(大观霉素)和由启动子驱动的感兴趣基因会插入至中性位点,而载体骨架(pUC)则会丢失,从而可以在S. elongatus PCC 7942中对重组基因进行表达。

Gibco® BG-11培养基—专门针对Cyanobacteria而优化

Gibco® BG-11 培养基是单独提供或在我们部分的GeneArt®试剂盒配置中有提供。这种培养基专门优化用于挑选的蓝藻的生长和维持,其中包括Synechococcus elongatus。其1X的配方使你可免除费力的培养基制备步骤。备受赞誉的瓶装设计使得其在生物安全柜中的操作更加简单,最小化污染风险,并帮助你更一致地进行细胞培养。优秀的包装和质量、更出色的可靠性、及蓝藻细菌培养中经改良的一致性可带来更出色的整体效率及数据。

可供研究生物生产的多样蓝藻

蓝藻细菌Synechococcus elongatus PCC 7942株是一种研究光合作用、生物周期节律、营养调控、环境响应、脂代谢等过程的极佳系统。蓝藻细菌也被称为蓝绿藻,是乙醇及其他化合物生物制备的常用平台,因为其基因组较小,可通过天然转化过程轻易进行遗传操作。