Transformation-Products-Algal-Expression

Chlamydomonas 的研究和开发中最大的障碍之一是将外源DNA引入到 Chlamydomonas 株中,因为它具有刚性细胞壁。可以使用玻璃珠搅动、电穿孔、微粒轰击等方法进行实验,不过这些方法常常会导致转化效率很低。用于藻类的AX Efficiency转化试剂是一种可增强转化效率的缓冲剂,可用于多种Chlamydomonas株。

MAX Efficiency转化试剂可提高Chlamydomonas细胞壁的透性并促进DNA通过电穿孔进入到细胞核中。只需简单地将Chlamydomonas细胞培养至对数早期,通过离心进行收集,然后在电穿孔前使用MAX Efficiency转化试剂清洗两次。迄今为止,我们已在10种不同的Chlamydomonas株中,包括野生型和突变型,观察到相比过去我们的GeneArt Chlamydomonas基因工程试剂盒和GeneArt Chlamydomonas TOPO基因工程试剂盒所推荐的条件来说,转化效率出现了极大幅度的增长。转化实验可使用环状或线状DNA以及PCR片段等。

  • 对于含细胞壁株,每μg DNA可获得 >1,000 个转化株
  • 对于不含细胞壁株,每μg DNA可获得 >100 个转化株
  • 可转化环状DNA或线性DNA,或者PCR片段

8种不同的Chlamydomonas reinhardtii株——CC1690, CC2935, CC1009, CC4414, CC118, CC536, WT137c, CC3395 wall(–)——均使用藻类MAX Efficiency转化试剂及TAP/蔗糖试剂通过电穿孔进行转化。这些数据显示出使用藻类MAX Efficiency转化试剂相比使用TAP/蔗糖培养基对C. reinhardtii WT137c进行培养可获得超过 >1,000倍的克隆数。