传统的杆状病毒表达系统使用了冗长耗时的大肠杆菌位点定向转座或昆虫细胞中长时间的同源重组以获得重组杆状病毒。与此相比,BaculoDirect™杆状病毒表达系统使用了快速的1小时 Gateway®重组反应来获得转染所需的杆状病毒,从而节省制备重组杆状病毒所需的数天时间。

BaculoDirect™ 系统的优点:

  • 最短时间内获得重组病毒的快速方法
  • 强力的多角体启动子可制得毫克级蛋白
  • C端或N端带有6xHis及V5标签
  • 灵活的Gateway®克隆技术可使用任意载体

获得重组病毒的快速方法

BaculoDirect™ 杆状病毒表达系统可使杆状病毒的表达更方便,所需手动操作时间相比传统系统更少。杆状病毒表达系统通常需要进行细菌转化及提取较大的杆状病毒或使用转化载体和线性杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞中。BaculoDirect™系统可加速研究过程,免除耗费时间的步骤,节约你宝贵的手动操作时间。

BaculoDirect™ 方法概述

我们的经基因工程改造的BaculoDirect™线性DNA含有 attR位点,可将你感兴趣的基因重组克隆至Gateway®初步克隆中。只需简单地将初步克隆与BaculoDirect™线性DNA和Gateway® LR Clonase™酶进行混合,然后孵育1小时,之后转染至Sf9或Sf21昆虫细胞即可进行重组病毒的制备。

针对表达需要进行基因工程改造

BaculoDirect™ 线性DNA设计用于简单地制备重组杆状病毒并在昆虫细胞中进行表达。除了含有attR位点可用于快速Gateway®重组克隆,其骨架序列还还有强力的多角体启动子,从而可进行高水平蛋白表达,以及C端或N端的6xHis和V5标签,可用于检测和纯化。此处右侧显示的是5种蛋白使用BaculoDirect™系统进行克隆和表达的免疫印迹分析结果。

阴性选择确保了病毒储液的纯度

使用300 ng的BaculoDirect™线性DNA及100 ng含GFP的Gateway®进入克隆来进行一小时的Gateway® LR反应。取用10微升LR反应体系转染2 x 106 个Sf21细胞,转染试剂为Cellfectin®试剂。细胞在含有10% FBS及100 µM阿昔洛韦的Grace培养基中培养72小时。

取用10微升的产物上清来感染2 x 106 Sf21个Sf21细胞。然后在将细胞在含有10% FBS及100 µM阿昔洛韦的Grace培养基中再次进行培养。72小时后,使用荧光方法对细胞表达水平进行检测。使用细胞进行β-gal染色并选择没有非重组病毒背景的细胞进行培养。