可实现高蛋白得率的强大的哺乳动物表达载体

pcDNA™3.3-TOPO® TA 哺乳动物表达载体可在粘附或悬浮哺乳动物细胞中使重组蛋白达到非常高的表达水平。

  • 可得到5倍高的蛋白得率
  • TOPO®克隆方法快速、简单、高效,可节省大量时间
  • 可表达天然蛋白质,适用于抗体制备和结构生物学研究
  • 可用于瞬时或稳定的哺乳动物表达
  • 完整试剂盒规格含有所有所需的克隆试剂

非常适合于大规模蛋白质生产

pcDNA™3.3-TOPO® 载体含有经修饰的增强型CMV启动子,从而可进行异常高水平的蛋白表达。该载体适用于大规模蛋白制备,在配合我们的FreeStyle™ MAX CHO或293表达系统时有最佳效果。我们对数种蛋白质表达进行了测试,使用我们的FreeStyle™系统时可观察到8–30 mg/L的重组蛋白制备水平(图1)。

图 1. 高重组蛋白得率。我们使用pcDNA™3.3-TOPO® 载体,在FreeStyle™ CHO-S细胞中克隆并表达了毫克级的红细胞生成素(EPO)、细胞因子IX (FIX)和IgG。 包含相关的PCR来源基因序列的pcDNA™3.3-TOPO® 组成被转染进FreeStyle™ CHO-S细胞(体积30 mL)。 较重和较轻的链上的基因进行共转染以便表达IgG。在转染后四到六天,采用固定处理的山羊抗人IgG抗体定量测定EPO和FIX 。每一栏显示了两次表达反应的平均值。
图 2. pcDNA™3.3 载体图,最新版本的pcDNA载体系列 pcDNA™3.3 使您可灵活表达天然蛋白质或在TOPO®克隆前向您感兴趣的基因标签添加您收藏的纯化标签。
仅需三个简单的步骤,节省时间、克隆效率更高

我们的pcDNA™3.3载体结合TOPO®克隆技术可免除那些耗费时间且不可靠的克隆流程步骤,使你可在5分钟内完成实验台上克隆反应。所期望克隆的恢复率达到95%,确保你可获得下游实验所需的克隆。

五倍高的表达效率
图 3.我们使用pcDNA™3.3-TOPO®载体、pCI 和pCMV-Script®载体克隆并测定了荧光素酶(图A) 和 半乳糖苷酶(图B)。在瞬时转染进贴壁培养的GripTite™ 293 MSR细胞后,ß-半乳糖苷酶活性和荧光素酶活性分别提高了 2倍和5倍(相对于使用pcDNA™3.3载体)。误差栏表示标准偏差(n = 6)。
完整试剂盒

pcDNA™3.3 TOPO® TA 隆试剂盒含有高效的One Shot® TOP10重组细胞,可获得出众的克隆效果。而我们的OptiCHO™抗体表达试剂盒含有pcDNA™3.3 TOPO® TA克隆试剂盒,可创建获得稳定细胞系并用于抗体制备,可用于无血清的二氢叶酸还原酶缺陷(DHFR–)的中国仓鼠卵巢(CHO) DG44细胞系。