TVivid Colors™荧光蛋白载体是我们的下一代克隆和表达工具,其采用Aequorea victoria来源的荧光蛋白(FP)对重组蛋白质进行简单无损的检测。搭配Gateway®和TOPO®克隆载体选项使用时,可让克隆、表达和观测变得前所未有地简单!

  • Aequorea victoria水母来源的FP有着广泛、可信的公开记录,值得信赖
  • 24小时内即可观测到荧光报告基因蛋白
  • 使用多种色彩,可用于共显影应用
  • 可轻松克隆到我们强大的Gateway®和TOPO®载体中

Vivid Colors™荧光蛋白载体产品指南

Vivid Colors™ 荧光蛋白的光谱属性

Vivid Colors™ EmGFP和YFP融合蛋白的表达,可通过使用标准FITC滤光片组的荧光显微镜或流式细胞仪检测到。为了最佳的可视性,推荐使用针对各种荧光蛋白激发和发射范围优化的滤光片组(参见下表)。

产看所有FP的激发和发射光谱

  推荐滤光片
蛋白质 颜色 激发峰 发射峰 突变 Omega Chroma
EmGFP 绿色 487 509 S65T, S72A, N149K, M153T, I167T XF100  
YFP 黄色 514 527 S65G, S72A, K79R, T203Y XF1042 41028
CFP 青色 452 505 K26R, Y66W, N146I, M153T, V163A, N164H XF114 31044
BFP 蓝色 308-383 440-447 F64L, Y66H, Y145F, V163A , N198S XF10 31021
Cycle 3 GFP 绿色 395478 507 F64L, F100S, M154T, V164A XF76  
 

Vivid Colors™ 荧光蛋白融合载体

此类Vivid Colors™载体用于在您的目的基因(GOI)的N端或C端融合荧光蛋白。我们为您提供Emerald Green(EmGFP)和黄色(YFP)荧光蛋白版本。您可以使用Gateway® 或者TOPO®克隆技术创建Vivid Colors™融合蛋白。Gateway® Destination载体 需要使用入门克隆,而TOPO®载体只需要您的GOI的PCR产物(TA Cloning®)。无论您选择哪种克隆技术,Ultimate™ ORF Collection都能为创建融合蛋白提供全面而方便的全长cDNA克隆资源。

  • 共表达您的蛋白质和Vivid Colors™荧光蛋白
    使用一个单一载体,表达您的蛋白的天然蛋白质结构和EmGFP。Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/ EmGFP-Bsd / V5-DEST载体让您能够快速鉴别被转染的细胞,以观察您的基因所赋予的生物活动。您将需要使用您的基因的Gateway®入门克隆形式,才能克隆进这个目的载体(DEST)。Ultimate ORF™ collection是服务于此的全面、方便的全长入门克隆资源。如果您已经拥有蛋白质的克隆产物,则可以用PCR扩增,并使用TOPO®技术进行克隆,以制备入门克隆。
  • • 使用其他Vivid Colors™荧光蛋白创建自己的载体
    pRSET/CFP(青色)和pRSET/BFP(蓝色)载体包含来自Aequorea victoria的其他颜色版本的荧光蛋白质。这些蛋白质通常与YFP和EmGFP共同用于多色应用。除了用于细菌表达和荧光蛋白纯化,这些载体也可以亚克隆构建定制哺乳细胞表达载体。
  • 慢病毒(Vivid Color™)emerald GFP对照表达载体
    为了优化慢病毒包装和转导效率,并监测被感染细胞,您需要pLenti 6.2/EmGFP-GW表达对照载体。这种载体可为您生成高浓度慢病毒制备品,可以表达EmGFP以及用于杀稻瘟菌素筛选。详细了解哺乳动物表达载体的病毒递送
其他荧光蛋白载体(Cycle 3绿色荧光蛋白)

如果需要使用其他启动子表达您的基因,或者使用其他选择标记来生成稳定细胞,可考虑使用pTracer™载体系列。这些载体可表达Cycle 3绿色荧光蛋白(Cycle 3 GFP),其激发和发射光谱与野生型GFP一致。虽然其几乎与Vivid Colors™ FP一样明亮,您需要使用合适的滤光片来观察到全面提高的亮度。

  • pTracer™/Bsd 表达载体
    选择CMV或者EF-1作为启动子,表达您的目的基因。pTracer™ EF载体表达您的蛋白质,并为其加上羟基端V-5和6xHis表位标记。pTracer™ CMV载体用于不加表位标记表达您的蛋白质。此类pTracer™ /Bsd载体表达作为Cycle 3 GFP融合产物的抗杀稻瘟菌素基因。
  • pTracer™/Zeo 表达载体
    选择SV40、CMV或者EF-1作为启动子,表达您的目的基因。pTracer™ EF载体表达您的蛋白质,并为其加上羟基端V-5和6xHis表位标记。pTracer™ SV40和CMV载体用于不加表位标记表达您的蛋白质。此类pTracer™ /Bsd载体表达作为Cycle 3 GFP融合产物的抗博来霉素基因。
  • 启动子鉴定
    如果您想鉴定一个未知启动子,则需要一个克隆和报告基因系统来监测PCR产生的突变的表达效率。pGlow和pBlue TOPO® TA表达试剂盒为使用PCR产物进行TOPO®克隆提供了便利,同时也能定量Cycle 3 GFP (pGlow)或b-半乳糖苷(pBlue)表达的启动子活动。
  • GFP (cycle 3) TOPO® TA 表达试剂盒
    此类载体可用于克隆PCR扩增的目的基因,以生成N端或C端融合Cycle 3 GFP的融合蛋白。使用TOPO®克隆,只需5分钟反应即可生成一个克隆。在验证融合蛋白方向后,即可用于表达。用以TOPO®克隆载体的载体元件包括一个CMV启动子,用来高水平表达您感兴趣的基因和一个抗新霉素标记。
高特异性Vivid Colors™荧光蛋白抗GFP 抗体

我们提供高特异性Aequorea victoria荧光蛋白抗体,包括多克隆抗GFP(兔血清)和抗GFP(兔IgG部分),可供蛋白印迹检测使用。这些抗体经过检测,表现出能与Vivid Colors™ EmGFP和YFP特异、强烈地反应。我们也提供很多不同的Molecular Probes®抗GFP抗体偶联物,为您提供多种检测技术选择。

抗GFP;兔多克隆抗血清(A6455)
抗GFP;兔多克隆IgG片段(A11122)
抗GFP;ABfinity®重组兔单克隆抗体(G10362)

荧光蛋白载体元素汇总
  感兴趣的基因   哺乳动物
描述 报告基因 实验形式 克隆方法 启动子 标记 选择
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/C-EmGFP-DEST Emerald GFP C端FP融合 Gateway® CMV   bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/N-EmGFP-DEST Emerald GFP N端FP融合 Gateway® CMV N端V5 bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/C-YFP-DEST 黄色 C端FP融合 Gateway® CMV   bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/N-YFP-DEST 黄色 N端FP融合 Gateway® CMV N端V5 bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/ EmGFP-Bsd/V5-DEST Emerald GFP 原色 Gateway® CMV   GFP-bsd融合<
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/C-EmGFP-GW/TOPO® 哺乳动物细胞表达载体 Emerald GFP C端FP融合 TOPO® CMV   bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/N-EmGFP-GW/TOPO® 哺乳动物细胞表达载体 Emerald GFP N端FP融合 TOPO® CMV N端V5 bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/C-YFP-GW/TOPO® 哺乳动物细胞表达载体 黄色 C端FP融合 TOPO® CMV   bsd
Vivid Colors™ pcDNA™ 6.2/N-YFP-GW/TOPO® 哺乳动物细胞表达载体 黄色 N端FP融合 TOPO® CMV N端V5 bsd
NT-GFP 融合 TOPO TA 表达试剂盒 Cycle 3 GFP N端FP融合 TOPO® CMV   G418
CT-GFP 融合 TOPO TA 表达试剂盒 Cycle 3 GFP C端FP融合 TOPO® CMV   G418
pcDNA™ -DEST47 Gateway® Vector Cycle 3 GFP C端FP融合 Gateway® CMV   G418
pcDNA™ -DEST53 Gateway® 载体 Cycle 3 GFP N端FP融合 Gateway® CMV   G418
pBlue TOPO® TA 表达试剂盒 beta-gal 不适用 TOPO® 任意 不适用 neo
pGlow TOPO® TA表达试剂盒 Emerald GFP 不适用 TOPO® 任意 不适用 neo
pTracer-CMV/Bsd Cycle 3 GFP 天然 R.E. CMV   GFP-bsd融合
pTracer-CMV/Bsd试剂盒 Cycle 3 GFP 天然 R.E. CMV   GFP-bsd融合
pTracer-EF/Bsd A, B, &amp; C Cycle 3 GFP 天然 + 标签 R.E. EF-1 alpha C端V5, 6xHis GFP-bsd融合
pTracer-EF/Bsd试剂盒 Cycle 3 GFP 天然 + 标签 R.E. EF-1 alpha C端V5, 6xHis GFP-bsd 融合
pTracer-CMV2 试剂盒 Cycle 3 GFP 天然 R.E. CMV   GFP-zeo融合
pTracer-CMV2载体 Cycle 3 GFP 天然 R.E. CMV   GFP-zeo 融合
pTracer-SV40试剂盒 Cycle 3 GFP 天然 R.E. SV40   GFP-zeo融合
pTracer-SV40 Vector Cycle 3 GFP 天然 R.E. SV40   GFP-zeo融合
pTracer-EF Kit Cycle 3 GFP 天然 + 标签 R.E. EF-1 alpha C端V5, 6xHis GFP-zeo 融合
pTracer-EF A, B, &amp; C 载体 Cycle 3 GFP 天然 + 标签 R.E. EF-1 alpha C端V5, 6xHis GFP-zeo 融合
pRSET/CFP Cyan (不适用:细菌表达克隆) 6xHis, Xpress™, EK 不适用
pRSET/BFP 蓝色 (不适用:细菌表达克隆) 6xHis, Xpress™, EK 不适用
pLenti6.2-GW/EmGFP 表达对照载体 Emerald GFP (仅有GFP对照;无克隆位点) CMV 不适用 bsd