在细胞培养中通过氨基酸进行稳定同位素标记(SILAC)是一种对复杂蛋白样品中发生相对差异变化的蛋白质进行鉴定和定量的有效方法。SILAC方法通过“重型”13C-或15N-标记的氨基酸在体内通过代谢掺入到蛋白质中,再通过质谱分析(MS)对蛋白进行快速且全面的鉴定、特征分析和定量。NeuCode氨基酸最多可实现同时分析四个样品。

  • 可重复性——消除了因样本制备过程的不同而引起的实验间变量
  • 灵活性——有L-赖氨酸和L-精氨酸缺陷型培养基,以及可根据需要单独添加葡萄糖、谷氨酰胺和酚红的 SILAC Flex等多种配方培养基
  • 适用性广——品类最全的SILAC液体和干粉培养基,以及独特的NeuCode氨基酸,带来了更高的样本同时处理能力
  • 简便性——培养基和氨基酸可作为单独试剂购买,试剂盒购买请点击
  • 兼容性——可在多种哺乳动物细胞系中表达标记蛋白,包括HeLa、293T、COS7、U2OS、A549、NIH 3T3、Jurkat等

订购信息


性能数据

使用SILAC试剂进行MS实验的步骤总结。将从细胞分离的蛋白提取物均一化后进行合并、再还原、烷基化处理,并过夜酶切。胶内酶解的工作流程:将样品进行SDS-PAGE电泳分离并切胶、酶切及纯化;溶液内酶解的工作流程: 样品直接被消化、分级并纯化。样品随后通过高分辨率Orbitrap LC-MS/MS进行分析。

SILAC实验的典型质谱图

SILAC实验的典型MS谱图。通过MS分析来自PCNA带有轻标和重标(13C6)L-赖氨酸的肽段(AEDNADTLALVFEAPNQEK)含有13C6 L-赖氨酸的重标肽段分子量增加了6Da,而由于肽段离子化后成为+2的离子,因此质荷比(m/z)比相应的轻标肽段增加了3,因此在质谱谱图上可以看到重标肽段比对应的轻标肽段向右迁移了3个单位。

表 1:SILAC同位素标记氨基酸可用于多重实验和分析

氨基酸 轻型 D4 13C6 D8 13C15N2 13C615N4
质量迁移 0 Da +4 Da +6 Da
+8 Da +8 Da +10 Da
L-精氨酸-HCl
货号:89989 (50 mg)
88427 (500 mg)
N/A
货号:88210 (50 mg)
88433 (500 mg)
N/A N/A 货号:
89990 (50 mg)
88434 (500 mg)
L-亮氨酸 88428 (500 mg) N/A 88435 (50 mg)
88436 (500 mg)
N/A N/A N/A
L-赖氨酸-2HCl 89987 (50 mg)
88429 (500 mg)
88437 (50 mg)
88438 (500 mg)
89988 (50 mg)
88431 (500 mg)
A33613 (50 mg)
A33614 (500 mg)
88209 (50 mg)
88432 (500 mg)
N/A
L-脯氨酸 88211 (115 mg)
88430 (500 mg)
N/A N/A N/A N/A N/A

表 2:Thermo Scientific的NeuCode系列同位素标记L-赖氨酸-2HCl 可用于多重实验和分析

+4 Da +8 Da
氨基酸 K202 K040 K080 K521 K341 K440 K602
质量迁移 4.00078 4.02511 8.01420 8.02637 8.03221 8.03853 8.05021
货号 A36754 (25 mg) 88437 (50 mg)
88438 (500 mg)
A36750 (25 mg)
A33613 (50 mg)
A33614 (500 mg)
A36753 (25 mg) A36851 (25 mg) A36752 (25 mg) A36751 (25 mg)
88209 (50 mg)
88432 (500 mg)

系列同位素标记的赖氨酸,通过不同的组合,可以在高分辨率条件下,将同时分析样品的能力从2个提高到4个。

使用SILAC试剂进行MS实验的步骤总结。将从细胞分离的蛋白提取物均一化后进行合并、再还原、烷基化处理,并过夜酶切。胶内酶解的工作流程:将样品进行SDS-PAGE电泳分离并切胶、酶切及纯化;溶液内酶解的工作流程: 样品直接被消化、分级并纯化。样品随后通过高分辨率Orbitrap LC-MS/MS进行分析。

SILAC实验的典型质谱图

SILAC实验的典型MS谱图。通过MS分析来自PCNA带有轻标和重标(13C6)L-赖氨酸的肽段(AEDNADTLALVFEAPNQEK)含有13C6 L-赖氨酸的重标肽段分子量增加了6Da,而由于肽段离子化后成为+2的离子,因此质荷比(m/z)比相应的轻标肽段增加了3,因此在质谱谱图上可以看到重标肽段比对应的轻标肽段向右迁移了3个单位。

表 1:SILAC同位素标记氨基酸可用于多重实验和分析

氨基酸 轻型 D4 13C6 D8 13C15N2 13C615N4
质量迁移 0 Da +4 Da +6 Da
+8 Da +8 Da +10 Da
L-精氨酸-HCl
货号:89989 (50 mg)
88427 (500 mg)
N/A
货号:88210 (50 mg)
88433 (500 mg)
N/A N/A 货号:
89990 (50 mg)
88434 (500 mg)
L-亮氨酸 88428 (500 mg) N/A 88435 (50 mg)
88436 (500 mg)
N/A N/A N/A
L-赖氨酸-2HCl 89987 (50 mg)
88429 (500 mg)
88437 (50 mg)
88438 (500 mg)
89988 (50 mg)
88431 (500 mg)
A33613 (50 mg)
A33614 (500 mg)
88209 (50 mg)
88432 (500 mg)
N/A
L-脯氨酸 88211 (115 mg)
88430 (500 mg)
N/A N/A N/A N/A N/A

表 2:Thermo Scientific的NeuCode系列同位素标记L-赖氨酸-2HCl 可用于多重实验和分析

+4 Da +8 Da
氨基酸 K202 K040 K080 K521 K341 K440 K602
质量迁移 4.00078 4.02511 8.01420 8.02637 8.03221 8.03853 8.05021
货号 A36754 (25 mg) 88437 (50 mg)
88438 (500 mg)
A36750 (25 mg)
A33613 (50 mg)
A33614 (500 mg)
A36753 (25 mg) A36851 (25 mg) A36752 (25 mg) A36751 (25 mg)
88209 (50 mg)
88432 (500 mg)

系列同位素标记的赖氨酸,通过不同的组合,可以在高分辨率条件下,将同时分析样品的能力从2个提高到4个。

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