蛋白富集可采用基于蛋白序列、抗体表位、翻译后修饰(PTM)或活性结合位点的多种不同技术实现对细胞蛋白质的分离。蛋白富集是蛋白质组研究中分离低丰度蛋白或降低样品复杂度的必经步骤。富集特定蛋白或蛋白复合物的方法中,最简单的有诸如免疫沉淀的免疫亲和技术,或是例如磷酸化蛋白富集这一类的翻译后修饰特异性亲和结合技术。新颖的Thermo Scientific™ ActivX™探针及富集试剂盒可特异性靶向多种不同类型的酶家族,包括激酶、GTPases以及丝氨酸水解酶。

  • 种类丰富——试剂盒可用于多种不同蛋白的富集
  • 性能优越——所有的试剂都经过优化,以最大程度提高蛋白产量并减少非特异性结合
  • 简单易用——易用的离心柱或磁珠式操作让蛋白的富集更加快速
  • 灵活兼容——与培养的哺乳动物细胞或组织均可兼容
  • 经过验证——所有的产品均已经过全面的测试,经处理后的样品也在Thermo Scientific™质谱仪平台进行过实测分析

为您的应用选择合适的蛋白富集产品

 
  磷酸化蛋白
富集试剂盒
链酶亲和素 IP-MS Kit 蛋白A/G IP-MS Kit 带有ATP探针的激酶富集试剂盒 ActivX TAMRA-FP丝氨酸水解酶探针
常见的研究目的 发现型蛋白质组学 靶向型蛋白质组学 靶向型蛋白质组学 发现型蛋白质组学 发现型蛋白质组学
靶标 磷酸化的蛋白 单一或同源蛋白 单一或同源蛋白 ATP结合位点 活化的丝氨酸水解酶
结合/标记机制 金属离子螯合物对磷酸基团的亲和力

生物素化抗体对靶标的亲和力

抗体对靶标的亲和力 生物素化ATP类似物识别活性位点的赖氨酸 TAMRA标记的氟磷酸盐结合活性位点的丝氨酸
富集靶标 酶解前(蛋白) 酶解前(蛋白) 酶解前(蛋白) 酶解后(肽段) 酶解后(肽段)
富集形式 IMAC 固定化的链霉亲和素 固定化的蛋白A/G 固定化的链霉亲和素 固定化的抗TAMRA mAb
基质 琼脂糖 磁珠 磁珠 琼脂糖 琼脂糖
  立即订购 立即订购 立即订购 立即订购 立即订购

MSIA 质谱法免疫检测试剂盒

在制药、临床和体育反兴奋剂工作流程中,MSIA微柱(枪头)可用于自动化亲和纯化生物样品中的稀有目标分析物,以进行大分子生物分析。

了解更多

蛋白质组学的自动化磁珠分离

磁珠和KingFisher纯化系统可实现免疫沉淀(IP)和其他亲和纯化方法的自动化,以便通过质谱进行蛋白质组学分析。

了解更多

性能数据

  靶标 A431 HEK293
抗靶标抗体 阴性对照 抗靶标抗体 阴性对照
%序列
覆盖度
EGFR 65% 0% 16% 0%
AKT1 36% 2% 68% 6%
AKT2 50% 0% 82% 0%
AKT3 8% 0% 62% 0%
PTEN 16% 0% 36% 0%

使用Thermo Scientific™ Pierce™ 链霉亲和素磁珠对中低丰度EGFR-AKT通路靶标蛋白进行富集并用于质谱分析。用生物素化抗体从两种细胞系(A431和HEK293)中免疫沉淀富集EGFR-AKT通路中的靶标蛋白,再用Pierce链霉亲和素磁珠进行捕获。将IP洗脱液在溶液中消化,并通过LC-MS/MS分析以评估序列的覆盖度并鉴定异构体特异性肽。

Western blot and MS workflows for targeted capture and analysis of enzymes.

用于酶靶向捕获和分析的Western Blot和MS工作流程。该示意图描绘了两个平行的工作流程,通过使用ActivX探针对激酶、GTPases或丝氨酸水解酶进行分析、捕获和检测。用抑制剂与酶进行预孵育后,可以通过针对探针标记蛋白的Western Blot(或仅适用于丝氨酸水解酶的荧光SDS-PAGE),或MS检测探针标记肽段来确定该抑制剂的特异性、亲和力和效力。

  靶标 A431 HEK293
抗靶标抗体 阴性对照 抗靶标抗体 阴性对照
%序列
覆盖度
EGFR 65% 0% 16% 0%
AKT1 36% 2% 68% 6%
AKT2 50% 0% 82% 0%
AKT3 8% 0% 62% 0%
PTEN 16% 0% 36% 0%

使用Thermo Scientific™ Pierce™ 链霉亲和素磁珠对中低丰度EGFR-AKT通路靶标蛋白进行富集并用于质谱分析。用生物素化抗体从两种细胞系(A431和HEK293)中免疫沉淀富集EGFR-AKT通路中的靶标蛋白,再用Pierce链霉亲和素磁珠进行捕获。将IP洗脱液在溶液中消化,并通过LC-MS/MS分析以评估序列的覆盖度并鉴定异构体特异性肽。

Western blot and MS workflows for targeted capture and analysis of enzymes.

用于酶靶向捕获和分析的Western Blot和MS工作流程。该示意图描绘了两个平行的工作流程,通过使用ActivX探针对激酶、GTPases或丝氨酸水解酶进行分析、捕获和检测。用抑制剂与酶进行预孵育后,可以通过针对探针标记蛋白的Western Blot(或仅适用于丝氨酸水解酶的荧光SDS-PAGE),或MS检测探针标记肽段来确定该抑制剂的特异性、亲和力和效力。

更多质谱相关蛋白纯化产品

Resources