对于溶液内酶解的工作流程来说,使用标准蛋白测定法测量样品裂解后的蛋白浓度至关重要,这个浓度需要用于蛋白样品/蛋白酶(w/w)比例的优化。此外,同质异序标记的上游,也建议要测定蛋白/肽段的浓度,以确保在混合之前用于标记的样品是完全等量的。由于大多数蛋白定量测定方法用于检测酶解后的肽浓度不够灵敏,推荐使用易用型的Pierce比色法或荧光法肽段定量试剂盒进行肽段浓度测定,此两款试剂盒是专为提高肽段混合物定量灵敏度和重复性而设计的。

  • 特异性——经优化专用于肽段浓度测定
  • 性能优异——两种检测方法均可最大程度提高灵敏度、准确性和可重复性
  • 方便——操作流程简单,并配备具有代表性的标准品
  • 确保验证——所有的产品均已经过全面的测试,经试剂盒检测过的样品也在Thermo Scientific™质谱仪平台上做过进一步分析验证

根据应用选择合适的定量方法

 
  比色法肽段定量试剂盒 荧光法肽段定量试剂盒
推荐的样品类型 肽段 肽段
测量方法 比色法(480nm) 荧光法(激发光 390, 发射光 75 nm)
线性范围 15-1000 µg/mL 5-1000 µg/mL
灵敏度 15 µg/mL 5 µg/mL
最低样品体积 20 µl 10 µL
最低样品体积时的检测量 300 ng 肽段 50 ng 肽段
检测时间 30 分钟 Xhol反应构建
主要特点 推荐用于TMT标记的肽段 推荐用于单一多肽
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BCA蛋白定量法是一种常用的比色检测法,由于可与含有高达5%去污剂的样品相兼容,相较于其他总蛋白浓度测定方法具有独特的优势。与大多数染料结合方法相比,BCA蛋白定量法受蛋白质氨基酸组成差异的影响要小得多,从而提供了更高的不同蛋白间的定量一致性。

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