修饰形式

修饰引物种类

提供多种修饰引物合成服务,种类包括:

5'修饰  Code 3'修饰  Code
Aldehyde ALD Alexa Fluor 488* 488
Alexa fluor 488 488 Alexa Fluor 532* 532
Alexa fluor 546 546 Alexa Fluor 546* 546
Alexa fluor 647 647 Alexa Fluor 647* 647
Alexa fluor 750 750 Alexa Fluor 750* 750
AMCA AMC Aminolinker C7 AMN
Biotin BIO AMCA AMC
Aminolinker C12 AMB BHQ1 BQ1
CY-3 CY3 BHQ2 BQ2
CY-5 CY5 Biotin TEG BIO
Digoxigenin DIG CY-3 CY3
FAM FAM CY-5 CY5
FITC FIT DABCYL DAB
HEX HEX Digoxigenin DIG
JOE JOE Eclipse ECL
Phosphate PHO FAM FAM
Rhodamine Green RGA JOE JOE
ROX ROX Phosphate PHO
TAMRA TAM Rhodamine Green RGA
TET TET Rhodamine Red RRA
Texas Red-X TRX ROX ROX
Thiol THL TAMRA TAM
Thiol-C6 S-S THS Texas Red-X TRX
    Thiol C3 THL
    Thiol-C3 S-S THS

修饰引物

我们提供包括5'修饰、3'修饰和内部修饰的多种修饰引物合成服务。

磷酸化(Phosphorylation)

5'磷酸化可用于接头,克隆和基因构建以及连接酶催化的连接反应。3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中,也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。

生物素(Biotin)

卵白素-生物素(avidin-biotin)技术应用广泛,包括用于非放射性免疫分析来检测蛋白质,胞内化学染色,细胞分离,核酸分离,杂交检测特异性的DNA/RNA序列,离子通道构象变化的探针等。功能化的生物素还可用在已包被的固相表面的的固定。最近也在探讨将这项技术用于光降解的生物素产品。所有这些应用需要包含有一个或多个的生物素标记的的特异性寡核苷酸。

地高新 (Digoxigenin)

地高新是一种从毛地黄植物分离出来的类固醇物质,因为毛地黄植物的花和叶子是这种物质唯一自然来源,所以抗地高新抗体不会结合到其他生物物质。地高新经由一个11个原子的间臂连接到脲嘧啶的C5位置。

杂交的地高新探针可以由抗地高新抗体来检测,这个抗体一般会与碱性磷酸酶,过氧化物酶,荧光素或胶体金偶连。或者没有偶连的抗地高新抗体但偶连的抗抗体。

地高新标记的探针可用于各种杂交反应,如DNA-DNA杂交(Southern blotting),DNA-RNA杂交(Northern blotting)斑点杂交(Dot blotting ),克隆杂交,原位杂交以及酶联免疫分析(ELISA)。

氨基修饰

  • 内部氨基修饰
    Invitrogen主要用C6-dT aminolinker来加到胸腺嘧啶残基上来进行内部修饰。修饰后氨基与主链相距10个原子距离,可用于进一步的标记和酶连接(如碱性磷酸酶),目前提供内部氨基修饰介导的dT-Dabcyl, dT-Biotin, 和dT-Digoxingenin 修饰。

  • 5'氨基修饰
    可方便的用于制备功能化的寡核苷酸,广泛的应用在DNA芯片(DNA Microarray)和多重标记诊断系统。Invitrogen目前提供5' C6 氨基修饰和5' C12氨基修饰两种, 前者可用于连接一些即便靠近寡核苷酸也不会影响其功能的化合物,后者用于亲和纯化基团的连接和一些荧光标记尤其是当荧光可能会因标记太靠近DNA链而被淬灭时。

  • 3'氨基修饰
    Invitrogen目前提供3' C6 氨基修饰。它可用于设计新的诊断探针和反义核苷酸,例如5'端可用高度敏感的32P或荧光素标记的同时3'可用氨基修饰以进行其他的连接。另外3'修饰抗3'外切酶消化从而可用于反义实验。
  • 巯基(Thiol)

    5'-巯基在很多方面与氨基修饰类似。巯基可用于加附各种修饰如荧光标记物和生物素。例如可以在碘乙酸和马来酰亚胺衍生物存在下来制作巯基连接的荧光探针。5'的巯基修饰主要用5'巯基修饰单体(5'-Thiol-Modifier C6-CE Phosphoramidite or the Thiol-Modifier C6 S-S CE Phosphoramidite)。用5'-Thiol-Modifier C6-CE单体修饰后必须进行硝酸银氧化以去除保护基(trityl),而Thiol-Modifier C6 S-S CE单体修饰后须用DTT将二硫键还原成巯基。

    间臂(Spacer)

    Spacer 可为寡核苷酸标记提供必要的间隔以减少标记基团与寡核苷酸间的相互作用,主要应用于DNA发夹结构和双链结构研究。C3 spacer 主要用于模仿核糖的3'和5'羟基间的三碳间隔, 或“替代”一个序列中未知的碱基。3'-Spacer C3用于引进一个3'间臂从而阻止3'端外切酶和3'端聚合酶发挥作用。 Spacer 18 常用于引进一个强疏水基团。

    硫代(Phosphorthioate)

    硫代修饰的寡核苷酸主要用于反义实验中防止被核酸酶降解。你可以选择全硫代,但随着硫代碱基的增加,寡核苷酸的Tm值会降低,为了降低这种这种影响,可以对引物两端2-5个碱基进行硫代修饰(许多人选择5'和3'各3个碱基进行硫代修饰。

    脱氧脲嘧啶 (DeoxyUridine,dU)

    脱氧脲嘧啶可以插进寡核苷酸来增加双链的熔点温度从而增长双链的稳定性。每个脱氧胸腺嘧啶被脱氧脲嘧啶替代可以增长双链熔点温度1.7°C.

    脱氧次黄嘌呤(deoxyInosine,dI)

    脱氧次黄嘌呤是一个自然存在的碱基,虽然不是真正意义上的通用碱基但当与其它碱基结合时会比其它碱基错配相对更稳定。脱氧次黄嘌呤与其它碱基的结合能力为dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT. 在DNA聚合酶的催化下,脱氧次黄嘌呤首选与dC结合。

    常用染料和荧光修饰基团

    染料 激发光 发射光 颜色 摩尔消光系统 BHQ淬灭基团选
    AMCA 353 422 Blue 19,000  
    6-FAM 495 520 Yellow-green 83,000 BHQ-0
    λmax 495nm
    range: 430-520nm
    Fluorescein 495 520 83,000 BHQ-1
    λmax 534nm
    range: 480-580nm
    TET 521 536 73,000
    JOE 527 548 Yellow 71,000
    HEX 536 556 73,000
    CY3 550 570 Yellow-orange 150,000 BHQ-2
    λmax 579nm
    range: 550-650nm
    TAMRA 544 576 90,000
    ROX 576 601 Orange 82,000
    Cy3.5 588 604 Orange-red 116,000
    Cy5 650 670 Red 250,000