Sanger 시퀀싱 반응 정제

시퀀싱 반응 이후에는 통합되지 않은 염료 terminator뿐만 아니라 모세관 전기영동 주입과 경쟁할 수 있는 염을 제거해야 합니다. 통합되지 않은 terminator는 시퀀싱 템플릿과 함께 이동하여 염기 정보 추출 오류를 유발하고, 과도한 염은 낮은 신호대잡음비를 유발할 수 있습니다.

에탄올 침전 방법은 템플릿 품질 변동에 민감할 수 있지만, BigDye® XTerminator™ Purification Kit는 확실한 화학 반응을 유도하여 템플릿 유형이나 농도에 상관 없이 일관성 있는 고품질 템플릿을 생성합니다. 염 이온, 통합되지 않은 염료, dNTP를 포함하는 BigDye XTerminator 비드 시약 sequester 시퀀싱 반응 불순물은 모세관 전기영동 중에 염료 표지 연장 산물과의 공동 주입을 방해합니다.

시퀀싱 템플릿 정제에는 템플릿 BigDye® XTerminator™ Purification Kit 사용이 권장됩니다. BigDye XTerminator는 긴 판독, 강한 신호, 우수한 짧은 분절 회수로 고품질 데이터를 제공하는 빠르고 간편한 정제 방법입니다. 정제는 10분 미만의 hands-on 수작업을 포함하여 40분이면 완료되고 액체 transfer가 필요하지 않습니다(그림 1). 그 결과로 나온 정제 샘플에는 염료 블롯이 없고, 안정화되어 있어, 정제 이후에 바로 모세관 전기영동을 실시하지 않을 경우에 유용합니다. 준수하기 쉬운 절차는 96-well 및 384-well 형식 절차에 맞게 수정할 수 있습니다. 밀폐된 반응 플레이트는 실온에서 48시간 또는 4°C에서 10일 간 안정적입니다.