siARN transcript in vitro

Ne limitez pas votre recherche à l’analyse de quelques siARN seulement
Les petits ARN interférents (siARN), composés d’environ 21 paires de bases d’ARN double brin avec des extrémités franches de dinucléotides 3’, sont désormais couramment utilisés pour induire l’extinction spécifique de gènes via la voie d’interférence ARN dans les cellules de mammifères. Les siARN les plus efficaces peuvent réduire l’expression génétique des cibles de > 90 %. Malheureusement, certains siARN n’ont qu’un effet minime ou nul. Pour trouver un siARN pouvant efficacement induire une dégradation des gènes, 3 à 5 siARN par gène sont généralement conçus et testés. Les études impliquant la dégradation de plusieurs gènes différents nécessitent donc la synthèse et des tests de nombreux siARN différents.

Réduisez le temps de préparation et les coûts liés aux siARN
Lorsque des siARN synthétisés chimiquement sont utilisés, les coûts liés à une seule expérience peuvent rapidement s’accumuler. En plus, les délais d’exécution des siARN personnalisés s’étendent souvent sur plusieurs jours. Le kit de construction de siARN Silencer™ produit des siARN prêts à la transfection à une fraction du coût de la synthèse chimique. Le kit se base sur une méthode de transcription in vitro en cours de brevetage et peut générer jusqu’à 15 siARN purifiés en moins de 24 heures. Les économies en coûts et en temps réalisées grâce au kit de construction de siARN Silencer permettent l’analyse de davantage de gènes et de cibles potentielles au sein de votre gène pour trouver le siARN le plus puissant.

Comment le kit fonctionne-t-il ?
La méthode de transcription in vitro comprise dans le kit de construction de siARN Silencer utilise de l’ARN polymérase T7 pour générer des brins individuels de siARN. Les modèles pour les réactions sont produits à partir de deux oligonucléotides d’ADN peu onéreux codifiant les brins de siARN souhaités. Ces oligonucléotides sont conçus pour inclure une séquence à 8 bases complémentaires à l’extrémité 3’ de l’amorce du promoteur T7 compris dans le kit. Les oligonucléotides sont chacun hybridés à l’amorce du promoteur T7 et une réaction de remplissage avec un fragment Klenow génère un modèle bicaténaire prêt à l’emploi dans la réaction de transcription in vitro. Après la transcription, les réactions sont combinées pour permettre l’hybridation des deux brins de siARN. La préparation de siARN est ensuite traitée avec de la DNase (pour éliminer le modèle) et de la RNase (pour polir les extrémités de l’ARN bicaténaire), puis purifiée en colonnes. La procédure entière ne nécessite que très peu de temps de manipulation et peut être terminée en moins de 24 heures.

Une solution de synthèse de siARN complète
Le kit de construction de siARN Silencer comprend tous les réactifs nécessaires pour générer et purifier jusqu’à 15 siARN double brin, prêts à la transfection. Un manuel d’instructions détaillées et un modèle de contrôle des siARN GAPDH sont également fournis. Les siARN spécifiques au GAPDH créés lors de la réaction de contrôle peuvent être utilisés pour optimiser les protocoles de transfection.

Pour obtenir de l’aide dans l’identification des séquences cibles potentielles dans votre ARNm, utilisez notre outil de recherche de cibles de siARN (sur Ambion.com). Les séquences cibles qui en résultent peuvent ensuite être envoyées directement à notre outil de conception de modèles de kits de construction Silencer en vue de créer des modèles d’oligonucléotides nécessaires pour l’utilisation de ce kit. Vous pouvez également vous rendre directement dans l’outil de conception de modèles (sur Ambion.com) et y copier vos propres séquences cibles de siARN.