Colorants polymères Super Bright

Le colorant Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 436 a une excitation maximum de 414 nm et un pic d’émission de 436 nm. Il est recommandé d’utiliser un filtre passe-bande de 450/50 ou équivalent, similaire au colorant Invitrogen™ eFluor™ 450 ou au colorant Invitrogen™ Pacific Blue™. Les anticorps conjugués du colorant Super Bright 436 sont notablement plus brillants que ceux qui sont conjugués au colorant eFluor 450, et représentent une option pour les conjugués Brilliant Violet™ 421 avec une résolution similaire pour les populations positives et négatives. Les études de stabilité indiquent que le colorant Super Bright 436 présente une perte minimale de fluorescence lorsque les cellules colorées sont exposées à une solution fixatrice à base de formaldéhyde jusqu’à trois jours ou exposées toute une nuit à la lumière ambiante.

Figure 1. Comparaison des performances du colorant Super Bright 436. Les cellules de moelle osseuse de souris ont été colorées avec un Anti-Ly-6A/E (clone D7) APC et un Anti-CD117 (clone 2B8) conjugué soit au (panel de gauche) colorant Super Bright 436, (panel du centre) soit au colorant eFluor 450 ou (panel de droite) au colorant Brilliant Violet 421.

Le colorant Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 600 est un colorant en tandem comprenant le colorant Super Bright 436 et un colorant accepteur avec une émission à 600 nm. Il peut être détecté grâce à un filtre passe-bande de 610/20. Les anticorps conjugués à ce colorant polymère en tandem sont comparables au colorant conjugué Brilliant Violet™ 605 en matière de brillance. Les anticorps conjugués au colorant Super Bright 600 sont stables pendant trois jours lorsqu’ils sont conservés dans une solution fixatrice à base de formaldéhyde.  

Figure 2. Expérience de cytométrie en flux multiplex. Les cellules sanguines périphériques humaines normales ont été diluées dans du tampon Super Bright Staining Buffer, puis colorées en surface avec les réactifs indiqués. Des cellules viables (établies à l’aide d’un colorant de viabilité fixable) ont été utilisées dans l’analyse pour discriminer les divers sous-ensembles de lymphocytes T.

Invitrogen eBioscience Super Bright 645 dye is a tandem dye consisting of Super Bright 436 and an acceptor dye that has an emission peak of 645 nm. It can be detected using a 660/20 bandpass filter or equivalent. Antibody conjugates of this tandem polymer dye are comparable, and sometimes superior in brightness to Brilliant Violet 650 antibody conjugates (Figure 3) with less spill over into other violet channels.

Figure 3. Fluorescence intensity comparison of Super Bright 645 conjugates and Brilliant Violet 650 conjugates. (A) Mouse splenocytes stained with anti-CD8a conjugated to Super Bright 645 (red, Cat. No. 64-0081-82) or Brilliant Violet 650 conjugate (gray), at the same concentration of antibody. (B) Human peripheral blood cells stained with anti-CD8a conjugated to Super Bright 645 (red, Cat. No. 64-0088-42) or Brilliant Violet 650 conjugate (gray), using the same concentration of antibody.

Super Bright 702 tandem dye, consists of Super Bright 436 and an acceptor dye that has an emission peak of 702 nm. Conjugates can be detected using a 710/50 bandpass filter or equivalent, and Super Bright 702 dye–conjugated antibodies are similar in brightness to Brilliant Violet 711 conjugates (Figure 4) with reduced compensation and less spillover into the Brilliant Violet 786 channel.

Figure 4. Fluorescence intensity comparison of Super Bright 702 conjugates to Brilliant Violet 711 conjugates. (A) Mouse splenocytes stained with anti-CD4 conjugated to Super Bright 702 (red) or Brilliant Violet 711 conjugate (gray), at the same concentration of antibody. (B) Human peripheral blood cells stained with anti-CD19 conjugated to Super Bright 702 (red) or Brilliant Violet 711 conjugate (gray), using the same concentration of antibody.

Comme avec d’autres colorants polymères, des interactions colorant-colorant non spécifiques peuvent se produire lorsque plusieurs anticorps conjugués par colorant Super Bright sont utilisés ensemble dans la même expérience. Si cela se produit, ces interactions risquent de produire des mouvements de populations inattendus. L’utilisation du tampon Super Bright Staining Buffer (réf. SB-4400-42) avant l’ajout des conjugués Super Bright atténue ce problème en renvoyant les populations à leur position prévue dans le diagramme. Lorsqu’on utilise des colorants Super Bright en combinaison avec d’autres colorants polymères, tels que les colorants Brilliant Violet, le tampon Super Bright Staining Buffer peut être utilisé pour minimiser l’interaction colorant-colorant. Le tampon Super Bright Staining Buffer est formulé pour être utilisé dans un test de 5 µL, ce qui le rend pratique pour la préparation de mélanges.

Figure 3. Le tampon Super Bright Staining Buffer atténue les interactions non spécifiques des colorants polymères. (A) Le tampon Flow Cytometry Staining Buffer (diagramme supérieur) ou le tamponSuper Bright Staining Buffer (diagramme inférieur) a été ajouté aux cellules sanguines périphériques humaines avant la coloration avec le colorant Anti-CD8a (clone RPA-T8) Super Bright 600 et le colorant Anti-CD4 (clone SK3) Super Bright 436. (B)Le tampon Flow Cytometry Staining Buffer (diagramme supérieur) ou le tampon Super Bright Staining Buffer (diagramme inférieur) a été ajouté aux cellules sanguines périphériques humaines avant la coloration avec le colorant Anti-CD8a (clone SK1) Brilliant Violet 605 et le colorant Anti-CD4 (clone SK3) Super Bright 436. (C) Le tampon Flow Cytometry Staining Buffer (diagramme supérieur) ou le tampon Super Bright Staining Buffer (diagramme inférieur) a été ajouté aux cellules sanguines périphériques humaines avant la coloration avec le colorant Anti-CD8a (clone RPA-T8) Super Bright 600 et le colorant Anti-CD4 (clone SK3) Brilliant Violet 421.

Informations contenues sur cette page :

• Colorant Super Bright 436
• Colorant Super Bright 600
• Super Bright Staining Buffer
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