Mutagénèse dirigée

Kits et systèmes à la fois robustes et très efficaces permettant de rationnaliser vos flux de travaux

• Rapidité—Le délai d’obtention des résultats est généralement inférieur à 3 heures pour un plasmide de 3 kb
• Précision—Modifiez jusqu’à 25 nucléotides (nt) par mutation de site
• Flexibilité—Générez des substitutions, des suppressions ou des insertions dans quasiment tout type de plasmide
• Simplicité—Un outil gratuit en ligne vous guide au fil des différentes phases de construction et de conception des amorces, et génère une séquence de construction finale permettant de simplifier la mise en œuvre

Figure 1.  Aperçu du flux de travaux de la mutagénèse dirigée GeneArt. Le système s’appuie sur les propriétés inhérentes de la méthylase d’ADN, de l’ADN polymérase, des enzymes de recombinaison et de l’endonucléase McrBC.

La mutagénèse à bases multiples est une pratique courante. Nous avons testé une substitution, une insertion et une suppression de 12 bases au moyen d’un plasmide pUC19. Une substitution de 12 bases aléatoire a été effectuée au sein d’une amorce mutée. Par ailleurs, un oligonucléotide de 12 bases aléatoire contenant un codon d’arrêt a été inséré au sein d’un plasmide pUC19 de type sauvage, suite à quoi ces mêmes 12 bases ont été supprimées en vue de restaurer le plasmide de type sauvage.

L’efficacité de la mutagénèse pour une substitution, une insertion ou une suppression de 12 bases était supérieure à 90 %. Les performances du kit de mutagénèse dirigée GeneArt étaient comparables à celles des kits de toute dernière génération de la société concurrente forme “Q”.

Prenez le contrôle dès aujourd’hui de vos expériences relatives à la mutagénèse