La PCR numérique est une nouvelle façon d’aborder la détection et l’évaluation quantitative d’acide nucléique, qui permet d’aborder la PCR quantitative en temps réel à des fins d’évaluation quantitative absolue et de détection d’allèles rares, selon une approche autre que celle de la méthode conventionnelle. La PCR numérique fonctionne en fractionnant un échantillon d’ADN ou d’ADNc en de multiples réactions de PCR parallèles. Certaines de ces réactions peuvent contenir la molécule cible (positive), d’autres pas (négative). Une seule molécule peut être amplifiée un million de fois ou plus. Lors de l’amplification, la chimie TaqMan avec des sondes marquées par colorants permet de détecter des cibles spécifiques à une séquence donnée. Aucun signal ne s’accumule si aucune séquence cible n’est présente. Suite à une analyse de la PCR, la fraction de réactions négatives permet de générer un comptage absolu du nombre de molécules cibles au sein de l’échantillon, sans avoir recours à des étalons ou à des contrôle endogènes.
L’usage d’une puce nanofluidique permet d’obtenir un mécanisme à la fois pratique et simple à utiliser pour exécuter des milliers de réactions de PCR en parallèle. Chaque puits est chargé d’un mélange d’échantillon, de Master Mix et de réactifs de dosage Applied Biosystems™ TaqMan™ ; il est alors analysé individuellement en vue de détecter la présence (positif) ou l’absence (négatif) d’un signal de point de virage. Pour compenser les puits qui auraient reçu plusieurs molécules de la séquence cible, un facteur de correction est appliqué selon le modèle Poisson.
Les réactifs et instruments de PCR numérique viennent améliorer les performances des dosages TaqMan existants, permettant ainsi des applications nécessitant une plus grande sensibilité, davantage de précision et une évaluation quantitative absolue supérieure.
